重组蛋白纯化后为什么会出现沉淀的情况?该如何解决?

　　在我们进行重组蛋白表达时，很多时候没办法一次性成功，往往会遇到各种各样的问题。比如，重组蛋白纯化后沉淀的情况，一般来说，蛋白都会悬浮在溶液中，为什么会出现沉淀的情况呢?今天普健生物就蛋白纯化后沉淀的现象和大家具体分析分析。

　　其实就发生情况来说，在镍离子亲和纯化蛋白时，蛋白沉淀的现象发生最多，主要原因如下：

　　1、在纯化过程中出现镍离子脱落的情况，而镍离子属于重金属，其会造成蛋白凝聚后沉淀的情况;

　　2、制备的溶液不符合蛋白的特性。换句话说，我们配置的溶液不达标，使得蛋白无法更好地溶解于溶液中，自然会析出;

　　3、还是溶液的环境影响，所配置的溶液的PH值里蛋白的等电点太过接近，一般这个时候的蛋白都比较容易出现沉淀情况;

　　4、温度因素。在4度的环境下，蛋白溶液容易滋生细菌等微生物，长时间可能会造成蛋白性质变化或降解，最终造成沉淀;

　　5、反复冻融。多次对半百进行冰冻和融化会造成蛋白结构的伤害，造成蛋白不溶;

　　当然了，重组蛋白出现沉淀的情况，并不是说蛋白就失去活性了，通过一定的手段，可以让蛋白重新溶解并使用。那么，如何解决蛋白沉淀的情况呢?

　　1、在使用镍柱纯化蛋白的时候，适当加入一些EDTA，通过其消除脱落下来的镍离子，从而减少其对蛋白的上伤害;

　　2、加入分散剂，减少蛋白分子之间的碰撞;

　　3、加入蛋白保护剂，防止蛋白的降解;

　　4、计算出蛋白的等电点，然后在配置溶液的时候，尽量避开这个等电点;

　　5、控制好温度，避免蛋白的热损;

　　6、对于那些难以单独纯在的蛋白，可以添加一些辅助蛋白，让其维持在一个很好的构象内;

　　7、特殊情况特殊对待，针对不同的蛋白，使用不同的保存方法;

　　总的来说，我们在进行重组蛋白制备的时候，不仅要做好相应的制备方案，蛋白的保存方案也需要做好，这样才能为客户提供更好的蛋白产品。盎然了，随着更多新型蛋白的出现，其发生沉淀的原因也会越来越多，我们需要根据蛋白的特性，调整相应的防沉淀措施。普健生物专业为广大用户提供重组蛋白制备服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。