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重组抗体表达项目案例

发表时间:2022-01-22 访问次数:326

一、实验目的

  本案例基于普健自有哺乳表达系统—高产量pATX系列载体及驯化CHO系列细胞,通过密码子优化,基因合成方法,合成重链和轻链的可变区,再分别通过亚克隆的方式将可变区构建至PATX系列表达载体,双质粒瞬时转染XtenCHO细胞,通过SDS-PAGE验证重组抗体表达情况,经表达验证后,扩大培养收集细胞上清并通过proteinA亲和柱纯化获得重组抗体。

二、实验方案

  (1)以客户提供的重链轻链序列为模板,通过密码子优化,选择更适宜XtenCHO细胞系的基因序列,进而确         定表达质粒的构建方案。

  (2)采用普健生物自主载体PATX进行构建,经测序验证无误后,提取无内毒素质粒。

  (3)转染前,确定XtenCHO细胞状态,待转染完成,培养数天后收取上清,通过SDS-PAGE验证重组抗体表         达情况,最后通过Protein A纯化法获得重组抗体。

三、实验结果

  (1)抗体纯度鉴定

重组抗体

图 1. 抗体质检图. 考马斯亮蓝染色.

A. 还原PAGE. B. 非还原 PAGE.

  (2)通过SEC-HPLC进一步纯化,获得单一峰的重组抗体,HPLC检测纯度在98%。

重组抗体

  (3)抗体交付

  纯化抗体产量:5L表达体系

抗体 浓度及分装 数量 质量
抗体 A 25 mg/ml;1ml/管。 20管 500 mg

         注:内毒素水平:0.45 EU/ml

相关服务

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