纳米抗体之噬菌体文库构建过程详解

　　在羊驼纳米抗体制备过程中，除了做好免疫和提取外，噬菌体文库的构建也是其核心过程之一，只有做好了这个过程，才能获得我们所需的抗体库。那么，在提取淋巴细胞之后，如何构建噬菌体文库呢?今天普健生物就在这里和大家一一介绍。

　　对于不同的公司来说，纳米抗体噬菌体文库的构建是各不相同的，不过主要的区别在一些细节流程方面，大体的制备过程如下：

　　1、提取RNA。将我们提取的淋巴细胞溶解后转移至新的离心管中，加入氯仿后混匀，离心15分钟后转至新的离心管中。加入等体积的异丙醇，静置10分钟后再次离心10分钟后，用75%的乙醇清晰沉淀，离心5分钟后去除上清液，而后将其溶解质无RNA酶的水中;

　　2、转录cRNA。将如上所得RNA一分为二，转录成cDNA;

　　3、扩增。将转录出的cDNA扩增到特定的抗体片段中;

　　4、克隆至噬菌体。将扩增所得的多样化抗体基因序列和噬菌体进行酶切，通过纯化后进行链接反应。而后再将所得DNA纯化后回收，并使用超纯水进行溶解;

　　5、扩增和纯化。将如上所得的噬菌体链接物进行培养，按照辅助噬菌体数目20:1的比例加入辅助噬菌体后继续培养30分钟，加入浓度50ug/ml的卡那霉素，30度下摇床培养。所得培养的菌体离心5分钟后提取上清液，冰敷30分钟后离心10分钟并去除缓冲物中的溶解沉淀。再加入nacl后，冰上孵育10分钟后离心15分钟，最终得到噬菌体库;

　　纳米抗体噬菌体文库构建的一些注意事项：

　　1、噬菌体文库容量和多样性是衡量文库优质与否的重要因素，一般来说，容量越大、多样性越好，构建的噬菌体文库质量越佳;

　　2、在RNA提取的过程中，RNA的降解和反转录过程中模板、引物及其用量，扩增轮数、细菌转化效率、连接体大小等因素我们都需要多注意一下;

　　总的来说，噬菌体文库构建成功与否，提取和扩增过程都是非常重要的，如果这几步的操作不成功的话，会在极大程度上影响到抗体制备的成功与否。所以，对于我们来说，只有做好这几个方面的工作，才能在更大程度上促进实验的完成。普健生物专业为广大用户提供噬菌体文库构建服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。