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盘点重组蛋白表达异常的一些常见解决办法

发表时间:2022-12-01 访问次数:595

  之前我们和大家聊过有关重组蛋白表达因为设计问题而导致的表达异常情况,可以说,它是蛋白表达失败很重要的一个原因。今天,我们再和大家聊聊有关因为操作方面失误而导致的相关问题,希望对大家的实验有所帮助。

  其实,重组蛋白表达失误的情况并不少见,只要注意如下几点,一般都不成问题。

  1、质粒构建问题。当我们在完成质粒构建后,除了普通的酶切鉴定和PCR鉴定外,还需要进行质粒的测序工作,只有在确保无任何突变的情况下,我们才能对其进行下一步实验。当然了,出现序列缺失或多余的情况就更不能进行实验了;

  2、宿主菌确定。在进行表达之前,我们需要确定宿主菌是正确可用的,如果有问题,则会直接造成表达失败;

  3、蛋白降解问题。一般来说,宿主菌内存在很多蛋白酶,它会造成蛋白的降解。所以,很多情况下,并不是蛋白没有表达,而是表达出来后又被降解了,这样,也很难让我们检测到蛋白的存在。一般这个时候,我们需要加入一些药剂来抑制蛋白酶的产生;

  4、培养基问题。选错培养基,或者选择的培养基营养液错误,也可能会造成表达失败(选择合适的培养基即可);

  5、分子异常情况。蛋白的分子量或大小等相关因素与预期偏差较大,这个可以说是因为设计或者中间过程出现了偏差导致,我们需要进行相关分析后再次进行表达;

  总的来说,因为操作错误导致蛋白表达异常的情况还是比较多的,这就要求我们在日常实验中多注重细节问题,只有做好了这些方面的工作,才能保证重组蛋白的高效表达。当然了,影响蛋白表达的因素还有很多,这就需要我们做好各类检测工作,只有达到了相应的需求后,才能进一步保障实验的成功率。普健生物专业为广大用户提供重组蛋白表达服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。