盘点在重组蛋白表达和纯化过程中会遇到的问题

　　重组蛋白表达过程中，合适的技术路线会让整个实验过程事半功倍，虽然说，经过多年的发展，技术已经非常成熟了，但是，这也是一个非常依赖经验的技术。所以，对于一些新手来说，在重组蛋白表达过程中，有很多需要注意的问题。有鉴于此，普健生物在这里和大家具体聊聊有关重组蛋白表达和纯化过程中常常会遇到的问题。

　　1、蛋白不表达

　　蛋白不表达的原因有很多，一般来说，大部分的都可以通过如下几个方面来判断。蛋白大小：一般来说，小于10kd或大于100kd的蛋白都是比较难以表达的;表达菌株与质粒是否配套;表达条件是否合适，比如诱导剂、温度等;培养基选择：对于不同的表达需求，需要搭配不同的培养基选择;当然了，表达成功与否也和表达量太低或是降解太快有关;

　　2、蛋白降解

　　在纯化过程中，常常会因为蛋白降解而导致表达失败。一般是因为细菌本身的蛋白酶所有引起的，所以，需要全程添加蛋白酶抑制剂;

　　3、蛋白纯度不高

　　蛋白纯化过程时并不是每次都完美洗去杂质，特别是镍柱纯化，杂蛋白较多，需要结合多种纯化方式联用;

　　4、条带与预测不符

　　蛋白表达后常常会以多种状态存在，因为电荷分布，会导致迁移速率有一定的变化，所以，会造成条带偏移，复性后的蛋白会存在着大小偏移的现象，而且翻译后修饰也会造成条带大小不一;

　　当然了，重组蛋白表达过程中会遇到的问题有很多，无论是诱导温度、湿度等方面的影响，以及各种抑制剂的添加，控制好细节方面的问题才能保证蛋白的表达。在研究过程中遇到问题，需要进行大量的排查、试错，这样才能在面对一个全新蛋白时，更好地进行控制。武汉普健生物专业为广大用户提供重组蛋白表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。