质粒转染的具体操作步骤及其注意事项

　　质粒转染，相信大家都不会陌生，在我们进行哺乳动物细胞蛋白表达和昆虫细胞表达中都会用到这个过程，可以说转染的效果直接影响到我们后期实验的成败。今天普健生物就和大家具体聊聊质粒转染以及在操作过程中需要注意到的一些事项，以便于大家更好地进行实验。

　　昆虫细胞扩大转染

　　1、挑选状态良好的细胞(选取活力在98%以上且在生长期内的)，将其放置于细胞培养的六孔板上，平均90万/空孔;

　　2、将细胞房在29度的培养皿上静置半小时，在细胞完全贴壁后再进行转染;

　　3、转染;

　　4、转染体系之后，再将其放置在室温下培养半小时以上;

　　5、孵育完成之后，再将其滴加到准备好的6孔板中;

　　6、在六孔板内培养4-6天后，取其上清液即可得P1代病毒;

　　转染过程中需要注意哪些事项?

　　1、细胞的密度

　　一般保持细胞密度在70%-90%时进行转染最好，过高或过低都会对转染的效果造成影响(细胞铺板和转染最好当天进行);

　　2、细胞的状态

　　尽量选择适度传代的细胞，而且不同批次的实验也尽量选择相同传代次数的细胞。而且细胞尽量保持均匀且密度一致，尽量确保不要选择被支原体污染的细胞;

　　3、细胞种类的选择

　　不同的细胞在做转染是所需要的体系是各不相同的，如果我们在一种体系上使用不同的细胞，纳米，其所得的结果是各不相同的。所以，同一种体系，尽量用同一种细胞;

　　4、转染试剂选择

　　试剂的选择一般我们都要遵循高效、方便、低价、低毒，一般来说，每种转染试剂都有相应的成功文献，我们完全可以按照那个来选择;

　　质粒转染虽然是基础性的实验，但是，它却制约着我们的实验是否成功的关键，所以，还是要花费不少心思的。普健生物专业为广大用户提供哺乳动物细胞表达以及昆虫细胞表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。