SPR亲和力测定

一、概述

　　亲和力是判定分子间相互作用的重要参数，是了解分子以及药物的发现与筛选等的重要指标。对于药效的评价、生物大分子及其复合体的稳定性的评估需要从动力学、热力学和热稳定性等方面进行：包括分子间的结合、结合的快慢、结合的强弱、结合的机理等多方面的全面性研究。

　　普健生物提供的表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)服务能够实现对蛋白，抗体、多肽、核酸及小分子化合物等相互作用的定性定量分析，也可以对细胞裂解液、文库样本等依托LSPR-Selex技术垂钓筛选未知靶标。

SPR芯片工作原理示意图

二、服务内容

三、实验流程

　　1、按照 OpenSPR^TM 仪器标准操作程序安装 NTA 芯片。

　　2、开始以最大流速(150 µL/min)运行，检测缓冲液PBS(pH7.4)。

　　3、达到信号基线后，调整缓冲液的流速到20 µL/min。

　　4、开始激活芯片，取出制备好的咪唑和NiCl2 溶液，通过进样口注入，与传感器相互作用5min完成芯片表面功能化，准备配体。

　　5、用激活缓冲液稀释用于固定的配体， 体积为200µL浓度为10-50µg/mL ，通过进样口注入相互作用4 min。

　　6、观察基线5 min，以确保稳定。

　　7、通过比较注入配体前后的信号测量配体结合的量。如果需要更多的配体，可以再次注入配体。

　　8、配体信号稳定之后，开始注入高浓度的分析物，以确认配体的活性，并确认表面大致的最大结合能力。

　　9、将流速提高到150 µL/min，注入适当的再生缓冲液，以去除分析物。

　　10、分析物用缓冲液稀释，浓度详见实验结果，并以20 µL/min 上样，蛋白与配体结合时间均为240 s;自然解离420 s。

　　11、本次实验结果所使用分析软件为：TraceDrawer (Ridgeview Instruments ab, Sweden)，分析方法是 One To One 分析模型。

四、结果分析

动力学及亲和力参数

　　结果说明：靶蛋白跟 Gidn 的亲和力为48 nM.

相关服务

　　重组抗体表达   抗体人源化   双特异性抗体   杂交瘤测序