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稳定细胞株的构建方法及其构建注意要点

发表时间:2023-04-10 访问次数:347

  在生物实验中,我们在很多时候都要用到稳定细胞株构建技术,但是如果采用质粒建系的话,不仅时间长,而且成功率低,可能耗时半年都不一定能得到想要的结果。那么,怎么才能稳定构建细胞系,并获得较好的结果呢?今天,普健生物就和大家具体聊聊。

  稳定转染,其实是相对瞬时转染来说的,就是将进入细胞中的质粒整合到细胞基因组中去,让其随着细胞的分类而不断遗传下去的方式。而瞬时转染则会因为整合基因的概率非常低而以游离的形式存在。

  什么时候需要使用到稳定细胞株构建呢?

  1、需长期研究目的蛋白时。对于那些需要长期研究的目的蛋白来说,不能存在太大的批次差,否则会造成实验结果不准的情况,这个时候就需要构建细胞株来保证蛋白批次相同;

  2、目的蛋白半衰期长时。对于一些半衰期较长的目的蛋白来说,瞬时RNA只能达到干扰表达的目的,却无法去除蛋白,这个还是可以用稳定细胞株来实现;

  3、需极高拷贝数表达时。目的蛋白需要极高的拷贝数时,往往会因为一些认为的因素而导致结果不准确的情况,这个时候,就需要构建稳定细胞株来帮助实验研究;

  4、需用到诱导表达系时。主要针对一些致死基因或时空表达的情况;

  5、需要使用到细胞时。比如裸鼠成瘤等atagenix;

  构建稳定细胞株有哪些要点?

  我们知道,稳定细胞株构建是一个长期的过程,无论是质粒构建,还是慢病毒包装,以及细胞转染和筛选,任何一个步骤都是至关重要的。甚至有的时候一个细胞株的构建就需要耗费半年的时间,只要一个步骤出错,就会造成实验的失败。所以,除了注意各个步骤外,我们还需要做好如下三点:

  1、优良的细胞种子。

  2、选择形状稳定的细胞。

  3、选择活力无损的细胞。

  总的来说,稳定细胞株不仅能降低成本,能够减少污染,而且能够有效地避免一些认为原因造成的影响,提升实验结果精确度。虽然说现阶段的稳定细胞株构建有着一定的局限性,但是,相信技术的发展下,未来一定能够解决这些问题。普健生物专业为广大用户提供稳定细胞株构建服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。

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