原核表达重组蛋白的一般步骤以及一些注意事项

　　原核表达相信大家一定不会陌生，简单来说，就是将需要表达的基因克隆到大肠杆菌中后，大量表达蛋白的一种方式，在蛋白纯化、定位、功能分析等方面都有着广泛的使用。那么，用大肠杆菌来表达重组蛋白有哪些好处?其步骤又是怎样的呢?

　　大肠杆菌表达重组蛋白的好处：

　　1、控制简单。之前我们就和大家聊过，大肠杆菌背景清晰，且易于成长和控制;

　　2、成本低。相对哺乳动物表达系统来说，大肠感觉表达蛋白的成本相对更低;

　　3、质粒选择多。拥有各种各样的大肠杆菌菌株及其与之匹配的质粒，选择更多;

　　原核表达重组蛋白的步骤如下：

　　1、获得目的基因。通过基因重组技术获得我们所需基因，并对其进行基因测序，以保障目的基因准确信;

　　2、准备表达载体。从大肠杆菌中找出合适与表达这段序列的质粒;

　　3、将目的基因插入载体中。将目的基因通过切段、植入等一系列的手段添加到质粒中;

　　4、宿主菌培养。对宿主菌进行培养，实现扩增;

　　5、诱导蛋白表达。通过外部环境刺激，诱导所需蛋白得以表达;

　　6、蛋白分析。对所得蛋白在特异性、活性等方面进行检测，看其是否为所需蛋白;

　　7、扩增及纯化。对符合需求的宿主菌进行扩增，而后进行大批量蛋白生产及纯化;

　　大肠杆菌表达重组蛋白的注意事项：

　　1、需要根据蛋白的最终应用来考虑表达载体，可选择融合表达;

　　2、融合表达时，外源DNA不能对转录、翻译的过程造成干扰;

　　大家应该不难看出，原核表达重组蛋白的方式其实和普通原核蛋白表达的方式没有太大的不同，只是说在获得目的基因的方式上有所不同，而且需要选择特定的质粒才能实现蛋白的表达。而就其他步骤而言，相差表达，但是在一些细节方面肯定会有所不同，这就需要有相关的经验来辅助了。普健生物专业为广大用户提供重组蛋白表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。

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