大肠杆菌表达重组蛋白时最常会遇到五个问题

　　大肠杆菌表达系统作为最常用来进行蛋白表达的五大系统之一，已经算得上是非常成熟地表达系统了。相对其他系统而言，其遗传背景清晰、操作简单、表达水平高、成本低、周期短等特点，使得其的使用非常的广泛，重组蛋白表达也常常会使用到大肠杆菌。那么，您知道大肠杆菌表达重组蛋白时常常会遇到哪些问题吗?今天普健生物就和您具体聊聊。

　　1、为什么要用到大肠杆菌表达系统?它的优势有哪些?

　　我们之前说到过，大肠杆菌繁殖速度快，大概20分钟就能实现倍增，而且转染率高;容易实现高密度培养，可以通过温度来实现直接控制;

　　2、哪些方法可以去除蛋白标签?

　　去除重组蛋白标签的方法主要有两种：酶消化法和化学裂解法。酶消化法其实就是利用肠激酶、凝血酶、烟草蚀刻病毒蛋白酶等去溢出蛋白标签的方式，是现阶段最常用的标签去除方法。化学裂解法他刚才用于融合伴侣蛋白的移除，使用范围相对来说要窄一些，但是胜在价格便宜;

　　3、所谓的最合适的表达宿主有哪些?

　　其实所的最合适的表达宿主需要结合实际情况以及蛋白需求来进行选择，成本投入不同、技术实力不同等选择的宿主也是各不相同。重组蛋白原核表达最常采用BL21和K-12来作为表达宿主;

　　4、为什么会出现低表达甚至无表达?

　　诱导前后蛋白纯在毒素或者表达过程中密码子有偏向性都会造成蛋白表达过低或是无表达的情况。我们可以通过控制本底表达水平、控制诱导表达水平、优化质粒DNA等方式来进行调控;

　　5、蛋白包涵体形成的原因有哪些?

　　蛋白形成的过程中如果形成了不正确的二硫键、出现错误折叠、缺少翻译后修饰等过程都可能会造成蛋白包涵体形成。我们可以通过表达分子伴侣、移除诱导剂、低温诱导表达、改变融合伴侣蛋白、该表表达宿主等一系列的方式来解决这个问题;

　　总的来说，这些都是我们在操作中会出现的一些小问题，但是，也恰恰是这些小问题制约重组蛋白表达成功与否。所以，在进行重组蛋白表达时，我们需要有专业的技术支持，用于解决各类可能会在遇到的问题。作为一家拥有十余年蛋白抗体制备经验的公司来说，普健生物专业为广大用户提供优质的蛋白抗体制备服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。