蛋白纯化的操作原理及其注意事项有哪些?

　　蛋白制备完成后，我们需要对其进行纯化以便于提升其各方面的性质。那么，如何进行蛋白纯化呢?一般来说，通过分子的大小、蛋白性质以及外部环境等方面的不同，对蛋白进行纯化。下面，普健生物具体和大家聊聊有关抗体纯化的常用原理。

　　1、分子大小

　　对于不同的蛋白来说，其分子大小也是各不相同的。所以，我们可以结合不同分子的大小，通过透析、超滤、离心分离等一系列的手段进行蛋白纯化操作;

　　2、分子形状

　　蛋白分子在离心通过溶液时，在通过膜、凝胶等填充材料时，都会受到分子影响。所以，对于不同形状的蛋白分子来说，可以利用这个方式来进行纯化;

　　3、蛋白溶解度

　　影响到蛋白溶解度的外界因素有很多，比如PH值、离子强度、温度等，都会在一定程度上影响到蛋白的溶解度。所以，通过调节PH值、温度等一系列的外界环境，提升蛋白浓度;

　　4、疏水性

　　对于不同的蛋白来说，其亲疏水性是各不相同的，而后通过调整盐水溶液浓度来析出蛋白;

　　5、蛋白稳定性

　　通过对热稳定性以及酶解稳定性等方面的调整，从而对蛋白进行纯化;

　　蛋白纯化过程中的常见问题有哪些?

　　1、层析柱的寿命有多久?填料的使用次数不同和条件有异，操作过程一定要规范，就能够保证层析柱状态最佳;

　　2、柱子堵了、超压如何处理?将柱子写下来，结合说明书进行相关操作;

　　3、如何去除核酸杂质?核酸带浮点，可以通过阳离子柱上流，从而有效去除核酸;

　　4、柱子进气泡了怎么办?一般来说是因为温度变化，我们可以用离子水或乙醇反响高速冲洗;

　　5、柱子有色素如何去除?结合填料的耐受情况，优先选择NaOH进行清洗，也可以使用有机溶剂清洗，在尝试酸，如果依然去除不掉，也可以选择定期更换填料;

　　总的来说，蛋白纯化的操作相对来说也没那么困难，结合蛋白特性，在结合相关文献，选择最合适的蛋白纯化方法。在纯化的过程中，做好相应的细节过程，这样才能获得更加优质的蛋白产品。普健生物专业为您提供蛋白纯化服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。