译后修饰(post-translational modifications,PTM)是指蛋白质在翻译后经历的一种共价加工过程,通过在一个或多个氨基酸残基上添加修饰基团,或通过蛋白质水解去除特定基团,从而改变蛋白质的性质。PTM类型包括经典的磷酸化(phosphorylation)、甲基化修饰(methylation)、 棕榈酰化(palmitoylation),以及新近发现的乙酰化(acetylation)、丙二酰化(malonylation)、琥珀酰化(succinylation)、乳酸酰化(lactylation)和糖基化(glycosylation)等。修饰性抗体因其能够特异性识别被修饰的氨基酸位点,广泛用于对相关蛋白质的定性和定量分析,是科研人员研究PTM在重要生命过程(如转录、重组、复制、DNA修复和基因组结构的调节)中的功能和作用时不可或缺的试剂。
修饰性抗体类型
磷酸化及磷酸化抗体
磷酸化修饰是指在细胞内蛋白质氨基酸上添加磷酸基团的过程。20世纪50年代,Edmond Henri Fischer 和 Edwin Krebs 发现了第一个蛋白激酶,即环腺苷酸依赖性蛋白激酶(cyclic-AMP dependent protein kinase, PKA),并首次提出了蛋白质可逆磷酸化修饰作为一种生物调节机制存在的概念。蛋白质磷酸化修饰是一个由激酶和磷酸酶共同参与的动态调节过程。激酶负责催化蛋白质的磷酸化,将三磷酸腺苷(ATP)末端(γ位)的磷酸基团转移到底物蛋白的特定氨基酸上,从而进行共价修饰。磷酸酶则通过水解反应催化已发生磷酸化修饰的氨基酸去磷酸化,将磷酸单酯水解为一个磷酸基团和一个游离羟基,以去除磷酸基团。了解磷酸化修饰的机制和功能对于研究细胞信号传导和生物调节至关重要。
磷酸化抗体能够特异性识别特定的磷酸化位点,从而检测蛋白在细胞受到刺激时磷酸化水平的增强或减弱。这些抗体反映了蛋白功能状态的变化,适用于磷酸化蛋白的定性和定量分析。磷酸化抗体在免疫学、生物化学、肿瘤学和蛋白质组学中得到了广泛应用,尤其在细胞信号传导、细胞凋亡和癌症等生命科学研究领域中起着重要作用。
甲基化及甲基化抗体
蛋白质甲基化是由甲基化酶催化作用于蛋白质特定残基的一种重要动态修饰和生物学现象,参与调控蛋白质信号通路。常见的甲基化修饰包括DNA甲基化、RNA甲基化和组蛋白甲基化。由于甲基化修饰在细胞信号传导、基因功能和遗传改变中起着重要作用,甲基化特异性抗体的制备显得尤为重要。甲基化抗体能够特异性识别特定的甲基化氨基酸位点,用于区分蛋白质的甲基化和非甲基化形式。它们可以对甲基化蛋白质进行定性和定量分析,广泛应用于免疫学、生物化学、肿瘤学和蛋白质组学等生命科学研究领域。
乙酰化及乙酰化抗体
蛋白质乙酰化是最常见的酰化修饰类型之一,最早由Allfrey等人在1963年于组蛋白上首次发现。根据乙酰化修饰发生的位置不同,乙酰化修饰可以分为三种类型:Nα-乙酰化、Nε-乙酰化和O-乙酰化。这些修饰在调控蛋白质功能和细胞过程方面具有重要作用。
乙酰化抗体能特异性识别靶蛋白的乙酰化形式及特定乙酰化氨基酸位点,检测该蛋白质的活性水平,用于区分蛋白质乙酰化和非乙酰化的存在形式,对乙酰化蛋白进行定性、定量分析,在细胞周期的调控、信号转导、神经退行性疾病、代谢疾病、癌症的发生发展等生命科学研究中应用广泛。
修饰性抗体制备服务普健生物提供的一站式修饰性抗体制备服务,包括多肽的设计与合成、多肽偶联、动物免疫、抗体纯化和QC检测等。普健生物在修饰性抗体定制开发方面具有丰富的经验,可提供磷酸化磷酸化抗体、甲基化抗体、乙酰化抗体的多克隆抗体服务和单克隆抗体服务。
服务周期
6-8周
服务内容
修饰性多肽设计与合成:根据客户提供的抗原蛋白序列和修饰位点免费进行抗原设计,依照客户需求合成修饰性多肽和非修饰性多肽
动物免疫:多肽抗原将被用来免疫动物(大鼠/小鼠/兔)并激发其产生针对特定抗原的抗体。可提供包括兔、小鼠、大鼠、豚鼠、羊、鸡的多克隆抗体定制服务以及大鼠、小鼠的单克隆抗体定制服务。
血清效价检测:检测第三次免疫、第四次免疫后的效价,免疫血清效价>1:128000
抗体纯化:使用修饰性与非修饰性多肽两轮亲和纯化
抗体验证:WB和IF、流式验证纯化后抗体,也可根据需求提供SDS-PAGE、ELISA鉴定
交付内容
多肽、未纯化抗血清小样、纯化获得的抗体(多抗)或大鼠、小鼠单克隆抗体(单抗)、singleB免单抗(序列)、1-3株单克隆细胞株、技术服务报告等。
最终交付的抗体经过多重检测验证,确保可特异性识别磷酸化(phosphorylated)/甲基化(methylated)/乙酰化(acetylated)的氨基酸位点。普健生物还可以按客户实际应用要求制定个性化免疫、筛选及检测方案,以满足客户验证要求。
普健生物协助客户发表文献展示
2024年1月,中国农业科学院兰州兽医研究所与中国科学院武汉病毒研究所合作,在《Journal of Cell Biology》上发表了题为“BLK positively regulates TLR/IL-1R signaling by catalyzing TOLLIP phosphorylation”的研究论文。研究发现,酪氨酸激酶BLK催化TOLLIP在Y76、Y86和Y152位点磷酸化,引发下游炎症信号级联反应。文中使用的磷酸化抗体p-TOLLIP-Y86由普健生物定制提供(详情见下图)。