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重组蛋白的多元化表达系统(三)

发表时间:2024-10-25 访问次数:43

昆虫表达系统

昆虫表达系统,尤其以杆状病毒表达系统(Baculovirus Expression Vector System, BEVS)为代表,已经成为一种广泛应用的异源蛋白生产手段。杆状病毒感染昆虫细胞后,其基因组上的外源基因在病毒复制过程中被转录和翻译,从而高效表达目标蛋白。这类系统不仅能够高效表达各种类型的目标蛋白,而且在蛋白后修饰、规模化生产等方面展现出独特的优势。

 

1)高级后修饰能力:与原核表达系统如大肠杆菌相比,昆虫细胞能够执行复杂的后修饰过程,包括糖基化、磷酸化、二硫键形成等,这对于需要特定翻译后修饰以维持功能的蛋白质至关重要。

2)高表达水平:BEVS能够驱动高水平的蛋白表达,部分情况下可达每升培养液数克的浓度,满足工业化生产的要求。

3)易于放大与操作:昆虫细胞,如SF9和High Five细胞,能够在摇瓶、搅拌罐等多种培养体系中良好生长,便于从小规模试验快速过渡到大规模生产。

4)安全性与合规性:昆虫细胞和杆状病毒对哺乳动物没有致病性,这减少了生物安全风险,同时也意味着相关产品较容易通过药品监管审查。

5)宿主范围广泛:除了传统的昆虫细胞系之外,BEVS也成功应用于哺乳动物细胞、植物细胞乃至酵母中,显示出了极大的灵活性和通用性。

应用场景

疫苗生产:杆状病毒/昆虫细胞系统常用于生产重组病毒样颗粒(VLPs)、亚单位疫苗等,如流感、HPV疫苗的部分成分。

生物制药:包括抗体、酶、生长因子等各种治疗性蛋白的生产。

基础研究:作为研究信号传导、蛋白质互作等功能的工具,昆虫细胞提供了接近哺乳动物细胞的表达环境。

农业生物技术:利用转基因昆虫抵抗害虫侵袭,减少化学农药的使用。

普健生物优势:

1.普健生物利用经典Bac-to-Bac技术,打造了一个快速简便高效的杆状病毒表达平台;该技术能够快速地产生重组病毒,而且不需要繁琐的空斑分析,大大提高了效率。

2.蛋白生产的周期短,通量大。可以实现细胞从小规模培养到大规模发酵的过程,使得蛋白产物甚至可以达到100mg/L的级别。

3.提供免费的病毒粒子扩增和储存服务,储存期长达2年。

案例:昆虫-杆状病毒系统表达大蛋白A(272 KD)

普健采用昆虫-杆状病毒表达系统,C端融合6*His标签表达了大小为272 KD的蛋白A,经过P1代表达测试,病毒扩增后分别转染Sf细胞和Tn细胞测定MOl,选取最佳表达条件进行P2代表达测试和200ml表达纯化,最终得到的蛋白A纯度90%,产量5mq儿。

 

图 蛋白A P1代表达纯化测试结果(还原SDS-PAGE)

A.考马斯亮蓝染色;B.WB(ECL发光,抗His标签抗体):第一列阴性对照培养基;1和 2转染的1和2号克隆;Medium:培养基;NPE:可溶上清;DPE:沉淀;+:阳性对照

昆虫-杆状病毒表达系统适合纯化的蛋白类型:

1. 含有基本糖基化需求的蛋白,如某些抗体片段、生长因子等。

2. 膜蛋白和跨膜蛋白,因昆虫细胞具有成熟的内质网和高尔基体系统,利于膜蛋白的正确折叠和定位。

3. 大规模生产的疫苗抗原,比如HPV病毒样颗粒、流感病毒表面蛋白等。

4. 需要快速响应和较高产出的蛋白,适合紧急情况下迅速扩大生产规模的需求

普健生物拥有不同生物表达系统,提供各种重组蛋白的生产纯化,涵盖不同科研领域的热门靶点,满足不同客户的实验需求。欢迎咨询!