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一、实验目的
本案例基于普健自有哺乳表达系统—高产量pATX系列载体及驯化CHO系列细胞，通过密码子优化，基因合成方法，合成重链和轻链的可变区，再分别通过亚克隆的方式将可变区构建至PATX系列表达载体，双质粒瞬时转染XtenCHO细胞，通过SDS-PAGE验证重组抗体表达情况，经表达验证后，扩大培养收集细胞上清并通过proteinA亲和柱纯化获得重组抗体。
二、实验方案
(1)以客户提供的重链轻链序列为模板，通过密码子优化，选择更适宜XtenCHO细胞系的基因序列，进而确 定表达质粒的构建方案。
(2)采用普健生物自主载体PATX进行构建，经测序验证无误后，提取无内毒素质粒。
(3)转染前，确定XtenCHO细胞状态，待转染完成，培养数天后收取上清，通过SDS-PAGE验证重组抗体表 达情况，最后通过Protein A纯化法获得重组抗体。
三、实验结果
(1)抗体纯度鉴定
图 1. 抗体质检图. 考马斯亮蓝染色.
A. 还原PAGE. B. 非还原 PAGE.
(2)通过SEC-HPLC进一步纯化，获得单一峰的重组抗体，HPLC检测纯度在98%。
(3)抗体交付
纯化抗体产量：5L表达体系
| 抗体 | 浓度及分装 | 数量 | 质量 |
| 抗体 A | 25 mg/ml；1ml/管。 | 20管 | 500 mg |
注：内毒素水平：0.45 EU/ml
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