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Xten™ Mab Single B兔单克隆抗体开发案例

发表时间:2022-10-26 访问次数:2277

  一、概述

  兔单抗与传统的杂交瘤鼠单抗相比具有更好的抗原识别功能。由于兔骨髓瘤细胞株受专利保护,无法利用杂交瘤技术开发兔单抗,普健生物建立了噬菌体展示抗体文库技术平台以及新型的Xten™ Mab Single B兔单克隆抗体开发技术平台。

  单个B细胞抗体制备技术是近年来新发展的一类快速制备单克隆抗体的技术,是根据每一个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列,以及每一个B细胞只产生一种特异性抗体的特性,从免疫动物脾组织或外周血中分离抗原特异性B细胞,通过单细胞PCR技术从分泌抗体的单个B细胞中扩增IgG重链和轻链可变区基因,然后在哺乳动物细胞内表达并获得具有生物活性的单克隆抗体。

Xten™ Mab Single B

图1. XtenTM Mab 兔单克隆抗体开发流程

 

  二、服务内容

服务项目 客户提供 服务内容 服务周期 交付内容
XtenTM Mab 兔单克隆抗体开发 抗原序列

抗原制备

动物免疫

脾细胞分离及阳性B细胞筛选

阳性克隆抗体可变区扩增及测序分析

重组抗体表达及纯化

12周

100µg/株单抗

pUC质粒

3株最优的抗体序列

技术服务报告

 

  案例展示:

  利用兔单B 抗体技术开发Anti-human CD86 兔单抗。选取血清效价大于128K 的兔子,分离PBMC细胞进行流式分选, 获得human CD86抗原特异性B细胞铺板。

兔单B抗体开发

图1 兔单B 细胞流式分选结果

  使用普健生物XtenCHO高密度瞬转表达系统,体外重组表达部分阳性克隆抗体,纯化后进行功能验证。

兔单B抗体

图2 兔单抗重组表达分析

  纯化后的抗体进行IF及内源WB 验证。IF结果显示抗体灵敏度高,抗原定位正确;内源WB 结果显示,主带明显,无非特异性结合条带。

兔单B抗体

图3 Anti-human CD86 兔单抗IF 检测结果

RAJI细胞,一抗1:50,二抗1:50, 曝光时间30ms

兔单B抗体技术

图4 Anti-human CD86 兔单抗内源WB分析

Lane 1: Daudi cell lysate ;Lane2: Raji cell lysate.