抗体纯化在我们生物实验中是必不可少的一步,它不仅能提纯蛋白来提升蛋白结合的效率,而且能够减少其他物质对实验结果的影响。可以说,蛋白纯化是后续实验能否更加精确的保证。但是,在蛋白纯化过程中,我们常常会遇到很多问题,这些问题可能会造成蛋白纯化率不高,更有甚者会造成蛋白出现更多杂质的情况。今天,普健生物就和大家具体聊聊有关蛋白纯化中一些可能会影响到纯化效率的几个内容。
说到蛋白纯化,其实原理很简单,它就是通过一些工艺分离出和产品相关的一些杂质,以达到获得高纯度、低潜在危害物的蛋白产品(主要去除过程中细胞、细胞碎片、宿主蛋白、宿主细胞核以及培养液中的一些养料成分)。而在蛋白纯化过程中,第一步就是离心和过滤。
在实验室中,纯化和离心只需要单次离心即可完成,而在大规模蛋白纯化中,则需要连续分离的方式,通过深层过滤、切向流过滤和连续流离心等方式来进行。
深层过滤相对简单且前期的投入少。因为深层过滤介质的孔径分步广,内表面积大,能够通过孔径截留和吸附双重作用达到过滤的效果。但是其本身不能达到无菌过滤,只能起到初步纯化的效果;
切向流滤器的使用则相对广泛一些,因为其流向可以减少细胞在膜表面的沉积,实现大体积细胞液不堵塞的效果。其主要使用中空纤维,表面积大,能够在孔腔内形成高剪切力;
连续流离心则是采用碟片式离心机进行连续离心,大规模纯化中则采用分离模式。其原理相对简单,离心机腔体为锥形,收获液靠近轴心,离心后通过轴心排出,细胞则在离心力的作用下聚集在锥形底部。但是设备的操作相对复杂,更加容易出现故障,需要一定的专业技术能力;
总的来说,离心为纯化的第一步,只有做好了这一步,才能为后续的纯化过程打好基础。而我们上面提到的几种方法,需要结合实际情况来进行选择,搭配好相应的处理方式,这样才能更好地得到我们所需要的结果。普健生物专业为广大用户提供蛋白纯化服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。