如何获得高质量的特异性纳米抗体

纳米抗体作为一种用途广泛的小分子抗体，因其体积小、亲水性强、稳定性好、易于生产等优势越来越受欢迎，尤其在疾病诊断与治疗、病原检测、药物残留分析、环境监测等领域都展现出了良好的应用前景。

纳米抗体(Nanobody，Nb)指重链单域抗体VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody) ，该类抗体只包含一个重链可变区（VHH）和CH2，CH3区，相比于其他抗体，轻链天然缺失。纳米抗体晶体直径2.5nm，长4nm，分子量一般在12-15KD，是自然存在的可以和抗原结合的最小片段。

纳米抗体VHH的表面大概只有10个氨基酸与人VH的不同，在FR2中存在有四个特异的氨基酸：普通抗体FR2中V37、G44、L45和W47这4个氨基酸残基是在进化中相当保守的疏水性残基，而VHH中，这四个突变为亲水性的氨基酸残基F37、E44、 R45、G47，增加了VHH的水溶性。利用这一特性，可将人源抗体VH的序列进行优化，对FR2中的一些氨基酸进行VHH特征性改造，从而使VH抗体的稳定性和溶解性更好，并且保持原有的特异性和亲和力。

纳米抗体和传统抗体的优劣对比

纳米抗体的制备
目前，制备纳米抗体主要途径使用免疫库和天然库进行制备。普健生物通过十余年的抗体发现技术的积累和迭代，具备完善的纳米抗体天然库和免疫库制备平台，提供羊驼免疫，纳米抗体VHH噬菌体建库及淘选技术服务，更有千亿级VHH纳米抗体天然噬菌体文库可淘选各类靶点抗原，大大缩短药物开发周期。

针对靶点B的特异性纳米抗体制备过程
普健生物可以提供针对特定靶点的特异性纳米抗体定制服务，包括抗原检测，羊驼免疫，采血，效价检测，纳米抗体噬菌体库构建及淘选，特异性高亲和力纳米抗体筛选，表达，检测一条龙服务。亲和力可以达到10⁸~10¹⁰M级别。

1. 靶点B免疫羊驼，进行四轮免疫后采血提取PBMC，经RNA提取，反转录获得cDNA后扩增获取VHH可变区片段；
2. 免疫羊驼纳米抗体库的构建：
将获得的VHH可变区片段连入噬菌体展示载体，电转宿主菌，最终获得库容为8.76x10^9纳米抗体库，插入正确率为100%
3. 免疫羊驼纳米抗体库的淘选及筛选：
利用构建的免疫羊驼纳米抗体库，针对靶点B蛋白，完成三轮淘选，其淘选富集度如下：

筛选96个克隆，其中阳性克隆共94个，阳性率为97.9%。

排除重复序列，最终获得了7条不同的抗体序列。将这些抗体序列表达成可溶性的VHH抗体蛋白，进行再次验证，结果如下：

随机挑选两条抗体蛋白进行亲和力测定，结果如下：
R1P1-A10：KD：6.49E-09M

R1P1-H12：KD：1.52E-07M