作为靶向特异性抗体的来源,兔比小鼠具有独特的优势。它们产生的亲和力抗体高于小鼠,并可能针对小鼠免疫原性差或耐受差的抗原或表位引发强烈的免疫反应。然而,由于小鼠融合伙伴细胞系的广泛应用,以及成熟的融合和克隆小鼠杂交瘤的工具和方案,目前绝大多数单克隆抗体来源于小鼠。噬菌体展示技术筛选抗体库是一种替代杂交瘤技术制备特异性单克隆抗体的方法。利用免疫动物的B细胞构建抗体文库,通过噬菌体展示技术对抗体文库进行筛选,可以获得高亲和力的非鼠源单克隆抗体。
基于噬菌体展示技术的兔免疫Fab库的建立,可以方便地分离兔单克隆抗体。免疫后,从动物脾脏中提取B细胞cDNA,通过PCR扩增抗体可变域库并组装成Fab库。然后将Fab基因克隆到噬菌体载体并转化到大肠杆菌,完成兔免疫Fab基因文库的构建。该文库可针对免疫抗原进行生物筛选,用于快速鉴定高亲和力、靶向特异性的兔单克隆抗体。
抗体库是编码特性未知抗体的抗体基因的巨大集合(通常大于1010)。抗体库是通过噬菌体展示和其他体外选择技术来发现抗体的重要来源,其设计是成功发现抗体的关键。抗体库的类型包括随机肽库、免疫库和天然库。
随机肽库:将化学合成的随机寡核苷酸序列与噬菌体的表面蛋白基因融合,在噬菌体表面表达出各种氨基酸组合的随机序列短肽。利用噬菌体展示随机肽库可以高通量筛选各种抗原的抗原表位
免疫库:免疫库由经过免疫(包括疫苗注射、微生物感染、自身免疫疾病、肿瘤等)后的供体B淋巴细胞的抗体基因构建。对于特定免疫抗原的抗体淘选的效率较高,但一般仅适用于一种特异性抗体的选择,库容量要求不高,一般106-108的库容量就可满足需要
天然库:采用不经免疫的人或动物来源的外周血淋巴细胞、骨髓、脾细胞的B细胞作为材料,进行基因扩增,但亲和力通常较低。骨髓内和骨髓外所有抗体基因都包含在内,所构建的抗体库适用于所有抗原所对应的抗体的选择,库容量要求较高,最小需要达到 109,因为目前估算的自然界的抗原种类在这个数量级上
普健生物构建了千亿级别、高亲和力全人源重组天然抗体文库,经过验证,任意靶点从文库中直接筛选,一般可以获得十几个到上百个高亲和力的克隆,其亲和力、特异性都达到行业领先水平。
优势:
1.序列正确性高,现阶段库容已达近千亿级别(1011pfu)。
2.两步法建库,先连入轻链再连入重链,将来自全世界不同地区人种来源的轻链和重链随机组合,保证了库的高质量和多样性。
3.分为κ和λ两种轻链亚型的单链抗体库,与大多数商业化混合库不同,即可用于筛选κ型抗体,也可用于筛选λ型的高亲和力抗体。
4.带有His标签,可直接用phagemid表达抗体,His标签纯化