鸡HNF 3β重组蛋白在大肠杆菌中的高效表达及其抗体制备

肝核因子3β (hepatocyte nuclear factor 3β, HNF 3β)作为一个重要的转录调控因子，参与哺乳动物的前肠胚和肝脏发育以及成体肝内的能量代谢，而HNF 3β在鸡(Gallus gallus)中的功能还不清楚。

肝细胞核因子(hepatocyte nuclear factor, HNF)包含HNF1、HNF2、HNF3、HNF4、HNF6和“CCAT”增强子结合蛋白，形成一个转录网络，调控肝细胞的分化，在胚胎发育和肝内代谢平衡中发挥重要作用。HNF 3β又称Forkheadbox A2 (FOXA2)，是转录调控因子3家族的一员，协同HNF 3α(FOXA1)促进前肠内胚层的建立和启动肝脏的发育；HNF 3β对成年小鼠(Mus musculus)肝内葡萄糖和脂类的平衡有着重要作用；HNF 3β缺陷还会影响胚泡着床和基质细胞蜕膜化，造成完全不育。

目前大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统是原核表达体系中最早被应用、也是最为成熟和应用最广的一种工程性表达外源蛋白的体系，其具有宿主细胞增殖速度快、操作方便、诱导调控表达机制清晰可控及外源蛋白产量高等优势。目前关于鸡HNF 3β的功能还知之甚少，特别是HNF 3β在繁育和能量代谢方面是否也具有重要作用？这是值得去研究和弄清楚的问题。而鸡HNF 3β有效抗体的缺乏，限制了对其功能的研究。为此，来自常熟理工学院的研究人员以大肠杆菌进行工程性表达鸡HNF 3β重组蛋白，并制备其抗体，为进一步研究鸡HNF 3β与靶基因的互作作用、揭示其功能提供重要的物质基础。

本研究中，研究人员通过优化合成了鸡Hnf 3β基因编码区片段，以pET 30a表达载体在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行重组蛋白HNF 3β的表达，用6 mol/L尿素变性包涵体，Ni2+对重组蛋白进行亲和层析，并以快速稀释法复性重组蛋白，以离心超滤法收集、浓缩目的蛋白；取纯化的HNF 3β重组蛋白和弗氏佐剂乳化后免疫兔(Oryctolagus cuniculus)，制备鸡HNF 3β的抗血清，以酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定抗血清效价后，用Protein A法纯化抗体；通过检测鸡肝癌细胞系(leghorn male hepatoma, LMH)中HNF 3β蛋白的表达情况验证所制备抗体的效果。

这项研究根据大肠杆菌对密码子的偏爱性优化了鸡Hnf 3β基因的编码区片段序列，该优化的片段。提高了鸡HNF 3β重组蛋白在大肠杆菌中的表达，快速稀释复性蛋白的方法能有效地从包涵体中获得高纯度的可溶性HNF 3β重组蛋白；纯度95%以上的重组蛋白免疫新西兰大白兔获得了较高效价的多克隆抗体，Protein A一步法制备、纯化了HNF3β的多克隆抗体，抗体对HNF 3β蛋白具有较高的特异性和效价，可利用此抗体检测鸡HNF 3β蛋白分子及研究HNF 3β的功能。


参考文献
[1]张景,潘玲,毛威威等.鸡HNF 3β重组蛋白在大肠杆菌中的高效表达及其抗体制备[J].农业生物技术学报,2022,30(04):809-816.