联系我们
在重组蛋白表达完成之后，最主要的一个步骤就是蛋白纯化，只有通过纯化后的蛋白才能投入下一轮的使用中，否则，很容易对后期的使用产生影响。蛋白纯化需要从复杂的混合物之中将目的蛋白提取出来，而且需要保持抗体的结构和功能。因此，了解蛋白纯化的原理和过程就显得尤为重要了。在本文中，普健生物将和大家详细地介绍一下重组蛋白制备时蛋白纯化的具体过程。
蛋白纯化的原理：
蛋白纯化在生物工程中是一项非常常用的技术，能够有效提升目的蛋白的纯度，对后期的使用和检测都有着非常好的促进作用。蛋白纯化需要结合样本以及杂质的特性来选择合适的方法，既要保证过程的简单，又要不对蛋白的特性造成影响。
当然了，对于纯度要求较高的实验来说，需要在常用纯化方法中添加一个例子交换或疏水作用色谱的中间步骤。
需要注意的是，在蛋白纯化的过程中，尽量选择哪些步骤少的纯化方式，因为每多一个步骤都会在一定程度上降低蛋白的产出量。
蛋白纯化的步骤：
1、样品准备。在准备好所有设备及耗材后，对目的蛋白进行预处理，去除杂质、组织、脂肪等，保证样品的生物活性;
2、准备好纯化柱。将纯化柱固定好，并打开封盖;
3、样品加载。将样品从纯化柱底部接入引流管，并将样品导入纯化柱内部;
4、洗脱。将纯化柱内充满样品后，对其进行洗脱。比如使用乙醇将杂质和缓冲液冲洗掉;
6、再生及使用。根据需要对纯化柱进行再生，恢复其功能，以便于下一次使用;
7、收集及检测。对收集所得上清液和洗脱液，并对所得样品进行检测，评估出目的蛋白纯度;
当然了，如上的重组蛋白蛋白纯化方法为一般蛋白纯化流程，具体的蛋白纯化需要根据蛋白的性质和需求来进行改变，虽然说大体过程相同，但是一些细节操作方面有着一定的不同。在实际操作中，还需要控制好实验的精确性，这样才能在更大程度上保证蛋白的完整度和生活活性。武汉普健生物专业为广大用户提供重组蛋白纯化操作，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。
