盘点在真核细胞培养过程中常常会遇到的一些问题

　　在我们进行真核细胞蛋白表达时，真核细胞培养是一个必不可少的过程，就和杂交瘤细胞蛋白表达中的杂交瘤细胞融合一样，它从根本上制约着真核蛋白表达的成功与否。然而，和蛋白表达一样，我们在进行真核细胞培养的过程中，也常常会遇到各种各样的问题。有鉴于此，普健生物在这里和大家聊聊有关真核细胞培养中的几个常见问题，以及遇到这些问题时的解决方案。

　　1、细胞不贴壁

　　在培养过程中，如果细胞不贴壁，一般来说造成这个现象的原因主要有三种：胰蛋白酶消化过度、支原体污染以及培养液中缺乏贴壁因子。这个时候，我们可以考虑通过降低胰蛋白酶浓度、分离培养物以及清洁支架的方式来解决问题。当然了，如果通过如上几个方式依然没有解决，那么，我们需要结合培养过程进行分析对比，找出其问题所在;

　　2、PH值变化快

　　培养液中PH值变化过快的原因相对较多，比如缓冲系统缓冲力不够、培养液盐浓度不正确、培养液污染、二氧化碳张力不够等等，当出现这个问题时，我们可以适当减少培养液中二氧化碳的含量，或者改用不依赖二氧化碳的培养液，并保证培养液的纯度，减少其污染来解决;

　　3、细胞生长缓慢

　　在预定时间内细胞培养量不足，细胞存在生长缓慢的情况。其原因主要是培养液选择不对、相关试剂保存不当以及培养液被污染(少量细菌或真菌感染)。当细胞培养缓慢时，我们可以考虑更换培养液成分、增加原始细胞浓度、补加谷氨酰胺或生长因子以及加入抗生素等方式来进行解决;

　　4、细胞死亡

　　培养一段时间后发现细胞直接死亡，这个现象发生的主要原因是培养箱内缺二氧化碳、箱内温度变化大、细胞损伤或死亡、培养过程中代谢物堆积等，这个时候，我们需要定时检测箱内二氧化碳含量、控制好箱内温度、实验前检测好细胞活性，并检测培养液的渗透压，这样才能在更大程度上避免细胞的死亡;

　　当然了，细胞培养过程中需要面临的问题还有很多，只有将这些方面都好了后，才能在更大程度上保证细胞的培养。对于真核细胞表达来说，只有活性好、质量高的细胞才能在更大程度上满足我们后期有关蛋白制备的需求。武汉普健生物专业为广大用户提供真核蛋白表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。