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掌握如下的方法,从此蛋白表达不用愁

发表时间:2022-09-29 访问次数:664

  蛋白表达的重要性我们就不在这里一一赘述了,就我们所知的抗体其实也是蛋白之一,所以,做好蛋白就标志着我们能否做好各种蛋白抗体产品。蛋白生产的过程其实不困难,其实就是将需要表达的片段添加到DNA中,成成nRNA,然后表达出需要的蛋白产品。说起来简单,但是做起来非常的困难。下面,普健生物就和大家具体聊聊蛋白的表达过程。

  蛋白的合成过程看起来并不困难,其实就是从DNA到mRNA,表达出来,就是蛋白了。

  一般的操作流程如下:

  1、克隆或合成目的基因

  2、构建载体

  3、蛋白表达、纯化及检验

  4、大量表达

  表达系统操作的详细步骤和所需时间:

  1、基因合成及密码子优化(一般需要耗时1-2周);

  2、载体构建。我们需要将目标DNA克隆至表达载体上,然后对质粒进行测序,测序合格后,再进行大量质粒的制备(一般这个过程需要持续1-2周);

  3、瞬时表达评估。主要进行瞬时表达及表达水平检测(通常需要耗时2周);

  4、稳定细胞株开发。主要进行细胞的稳定转染及筛选,MTX扩增及筛选,细胞建库等工作(一般来说需要耗时12-20周);

  5、大量表达。在如上的过程正常实现后,将细胞投入大量生产,并对其进行纯化工作(一般耗时2-3周);

  总的说来,蛋白表达的过程其实并不显得特别的困难,相比单克隆抗体的制备过程来说,也不那么繁琐,但是,如果不注意相应的细节问题,依然容易出现失败的情况。所以,在日常制备单边的过程中,我们需要注意到一些细节方面的问题。普健生物为您提供专业的蛋白制备服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。