蛋白纯化之前常用的一些提取和分离方法简介

　　蛋白纯化之前我们都需要优先对其进行提取和分离，这样能够极大减少我们纯化的过程，而且能让纯化的效果更好。那么，所谓的蛋白提取和分离是具体操作的呢?今天，普健生物就在这里和大家具体降解。

　　对于固态样品材料我们采用先提取后分离的方式，对于微生物发酵或动植物细胞培养所得的悬浮液则会因为细胞内和细胞外的情况而方法不同。

　　细胞内：需要先破碎细胞，并且在细胞破碎的过程中加入蛋白抑制酶，以防止细胞内蛋白的降解。同时尽量保持在低温情况下操作;

　　细胞外：因为蛋白存在于悬浮液中，我们只需要对其进行离心、过滤等过程就能进行固液分离，去除其他颗粒物质;

　　为了保证提取出更多目的蛋白，并减少其活性确实，我们常常采用各种水溶液来辅助分离，通常在偏离蛋白等电点0.5ph单位以上时，能更大程度上提升蛋白的溶解度。

　　1、对于等电点在碱性范围内的蛋白，我们可以考虑加入稀酸;

　　2、对于等电点在酸性范围内的蛋白，可以用稀酸提取(这样有助于提升蛋白在提取液中的溶解度);

　　当然了，在加入稀酸的过程中，我们也要注意提取液的PH值，一定要保证过期在蛋白稳定的范围内。

　　在细胞破碎后进行的蛋白提取，因为大部分的目的蛋白在悬浮液中，为了减少损失，我们需要使用到力量的缓冲液。

　　对于动物组织来说，使用的缓冲液为动物组织的2-2.5倍;

　　对于植物细胞来说，只需要使用少量的缓冲液即可;

　　当然了，细节方面的操作也很多，而且在通过离心、沉淀等一系列的过程后，蛋白的纯度有了一定的提升，但是还是达不到我们使用的要求。这个时候，我们就需要对蛋白进行进一步的纯化工作，通过一系列的纯化手段，才能得到适宜浓度的蛋白产品。普健生物专业为广大用户提供蛋白纯化服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。