普健生物-盘点提升蛋白表达成功率的几个方法

　　在蛋白表达过程中出现失败的情况是很正常的，有很多人天天泡论坛，天天做实验，但是蛋白表达的成功率依然不是很高，这是为什么呢?采用哺乳动物表达系统来表达蛋白，能够客服修饰蛋白表达的问题，而且能够实现高度人源化，可用于结构、功能分析等。

　　哺乳动物表达系统最常用的两个方式是瞬时表达和稳定转染。稳定转染也就是我们常说的稳定细胞系构建，表达原理就是将外源基因转染到细胞染色体生，让其可以长期稳定地生产蛋白。虽然说生产的蛋白质量高且设计性强，但是，价格相对较高，周期长，操作难度也相对较大。所以，我们常用瞬时转染来进行表达。

　　那么，如何提升瞬时表达的效率呢?

　　方法一：编码优化

　　根据应用设计出最佳编码序列，同时为其选择最合适的表达载体，这样，就能在极大程度上提升蛋白表达的成功率。也就是说，我们在开始蛋白表达之前，使用密码子优化算法，计算出合适的编码序列，这样可以节约时间、精力和成本;

　　方法二：提升溶解液浓度

　　很多时候，我们用来溶解蛋白的溶液浓度相对较低，使得蛋白表达量低，所以，出现这种问题的时候，我们可以考虑适当提升一下溶解液的浓度;

　　方法三：搭配融合伴侣

　　我们可以适当地在重组蛋白中添加短肽序列，也就是我们常说的蛋白标签。这种方法可以有效地提升蛋白的表达效率，而后再用酶切技术或者化学试剂去除掉标签;

　　方法四：纯化优化

　　根据上下游蛋白需求和纯度的不同，设计出不同的纯化方法。比如蛋白表达量高，就可以考虑使用一步式亲和纯化。如果需要进一步地纯化，则可以进行分子排阻色谱，如果在这个基础上需要继续纯化的话，则可以考虑使用更高的纯化方式;

　　总的来说，通过如上的四种方法可以在极大程度上提升蛋白表达的效率及成功率，当然了，在日常实验中，需要结合实际情况来选择合适的方法。同时，我们在做实验的时候，需要多注意一些细节方面的问题，比如温度控制、PH值等等，这些细节都做好了，就能够在更大程度上保障实验的成功率。更多蛋白表达的知识，敬请关注普健生物。