在纳米抗体制备过程中,羊驼免疫可以说是制备的起点,只有这个过程进行得顺利,后续的实验才能够得以进行。那么,羊驼免疫的具体过程您知道吗?今天,普健生物就在这里和大家一一介绍。
1、抗原准备。一般来说,一只羊驼可以同时免疫1-3个抗原,剂量保持在1-2mg之间,在免疫前,我们需要将抗原与佐剂以1:1的比例进行混合,并在4度环境下保持一段时间;
2、免疫羊驼。记录羊驼耳号,而后从羊驼颈部静脉2点注射,每点注射0.4mL混合液。观察半小时后,如果羊驼状态良好,则每2周再免疫一次;
3、采血。4次免疫后,每隔5-7天采血一次,每次50mL;
4、血清分离。每次采血都从其中抽取5mL血液进行预冷,而后在25度环境下进行离心,30分钟后去其上层血清用于抗体效果评价;
5、淋巴细胞提取。在离心管中加入分离液,然后以1:1的比例加入血液(注:注入血液时要缓慢注入,防止血液与分离液混合),之后离心30分钟,而后将上层血清保存到新的离心管中,-80度保存。取出其中棉状免疫细胞至新的理线管中,加入PBS缓冲液,25度下离心20分钟,去除上清液,根据细胞数目溶解分离出淋巴细胞溶液,-80度保存;
关于免疫中需要注意的一些事项:
1、羊驼和抗原的选择直接关系到实验的成败,所以,我们尽量要选择健康强壮状态良好的羊驼,并选择合适纯度的免疫抗原;
2、淋巴液需要及时分离提取,这样才能在更大程度上防止溶血情况的出现;
3、免疫周期也可能会影响到免疫效果,一般1-2周间隔免疫最好;
总的来说,羊驼免疫过程中需要注意到的事项很多,但是如果我们按照实验规范严格操作的话,就能有效提升实验的成功率。对于大部分的客户来说,自己免疫的成功率和成本投入量是非常高的,这个时候我们就可以考虑直接购买纳米抗体的方式,所得的纳米抗体无论是质量上还是纯度上都能够达到实验要求。更多纳米抗体制备知识,尽在普健生物。