在蛋白制备的过程中,我们常常会利用一些方法来判断蛋白的性能,比如SPR(分子间相互作用力分析),就能够很好地为之后蛋白制备提供数据支持。随着技术的不断进步,各种各样的方法也营运而生。今天,普健生物就在这里和大家盘点常用的几种蛋白互作技术及其优缺点。
1、免疫共沉淀技术
免疫共沉淀(Co-lmmunoprecipitation,COIP)技术其实就是利用抗原与抗体之间的特异性结合原理而成。主要是通过在细胞裂解液之中添加特异性抗体,而后再通过静置等一系列的手段让其沉淀。而后再通过质谱法来检测抗原的结合蛋白成员;
免疫共沉淀技术的优点是其过程更加符合体内真是生理情况,而且实验条件温和,不会出现人为影响的情况;缺点也非常明显,对于那些结合力弱或者会瞬间结合的蛋白来说,研究起来就相对困难一些;
2、Pull Down技术
Pull Down技术则是通过先谷底固化或已经标记过的蛋白或标签蛋白从裂解液中特异性结合出其中的蛋白的方式。这个方式也是利用分子间相互作用的方式,但是和COIP技术不同,它需要先把诱导蛋白纯化出来后,才能与目的蛋白溶液进行孵化,无法自行模拟细胞内的天然环境;
3、双分子荧光互补技术
双分子荧光互补技术其实就是通过荧光蛋白多肽链上进行操作,在其末端新增两个多肽片段,然后将其分别连接到能发生作用的目标蛋白上。以为你目标蛋白发生反应,且含有荧光蛋白,就能够让其产生荧光。这个技术最大的优点就是让其实现了可视化,不过操作相对要复杂一些;
4、酵母双杂交技术
酵母双杂交技术可以说是现阶段使用最为广泛的一项技术了,也是现阶段最重要的方法之一。其通过将靶蛋白和诱饵蛋白特异性结合后,因为诱导蛋白结合了基因的启动子,将其置于酵母细胞内进行表达,如果能检测到基因表达的产物则说明双方有相互作用,反之则表示没有。这个方法成本低、检验结果迅速,操作简单;
当然了,在蛋白研究的过程中不可能仅仅就这几种方法,还有噬菌体展示技术、等离子共振技术、抗体蛋白阵列技术等等,我们就不在这里一一详述了。相对来说,后面提出的这些方面在技术和成本上有着更高的需求,需要具备一定实力的企业才能展示,我们在后面再和大家详细描述。普健生物专业为广大用户提供蛋白抗体制备和定制服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。