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盘点重组蛋白表达实验中设计上的一些表达异常分析

发表时间:2022-12-01 访问次数:529

  重组蛋白表达实验中,即便是完全按照自己设计的程序来操作,也可能会出现各种各样的问题,只要这些问题出现,基本上就代表我们的实验没成功。其实,实验做多了之后,这种问题可以说是非常的普遍。有鉴于此,普健生物就和大家总结一下有关重组蛋白表达过程中常见的一些表达异常的情况及其解决办法。

  1、密码子位移。外源基因序列内部核糖体结合位点出现偏移,或者受到一些其他因素干扰,导致密码子出现位移的情况;

  2、稀有子密码问题。我们可以使用相关软件对稀有子密码进行分析,在进行重组表达之前,对蛋白序列进行优化。我们纸袋,在蛋白表达起始位点前的15个氨基酸密码子至关重要,连续的两个稀有子密码可能会造成表达效率降低的情况。所以,我们可以通过对其进行优化,避免如上可能会出现的问题后再进行表达;

  3、信号肽表达问题。一般来说,大肠杆菌缺乏加工蛋白信号肽的机制,所以,我们在进行相关真核表达时候,需要引起额外的注意;

  4、GC含量高问题。一般来说,基因序列中GC含量超过70%的时候,就很难进行蛋白表达了,想要表达成功,我们只能进行相关优化工作,降低其中GC含量后再表达;

  5、蛋白大小异常问题。小于10KD或者大于100KD的蛋白都难以表达,如果遇到这种蛋白,可考虑使用其他办法;

  6、蛋白标签选择问题。通常我们需要在蛋白表达中加入各种标签,可一些标签会影响蛋白表达,甚至造成蛋白表达不成功。这个时候,我们就需要考虑采用一些易于表达的标签,不要选择难以表达的标签;

  在重组蛋白表达的过程中,我们常常会遇到这样或者那样的问题,一般来说,我们只需要根据实验的要求来进行,都不会出现什么问题。牢记如上的六点,在表达过程中多注意相关情况,相信蛋白表达失败的概率不会太高。普健生物专业为广大用户提供重组蛋白表达服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。