我们在进行蛋白表达的时候常常会接触到一个概念:原核表达和真核表达。起初我一直以为原核表达只是蛋白表达的一种方式,用来和真核蛋白表达进行区分。但是后来才发现,这个表达的意义不止于此。为了让大家更加方便地了解相关信息,普健生物在这里和大家具体聊聊。
什么是有原核蛋白表达?
所谓的原核蛋白表达其实就是通过基因克隆技术,将外源目的基因通过构建表达载体,并通过表达菌株,使得其在特定的原核生物中得以表达的方式。简单来说,就是将目的基因克隆到载体的表达序列中,而后通过特定的原核生物表达出来的方式(目前最常用的表达菌株为大肠杆菌,也就是说,绝大多数的目的基因都是在大肠杆菌中表达出来的)。
那么,原核蛋白表达的原理是什么呢?
按照宿主来分,原核表达系统常用的有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统。而大肠杆菌因为其遗传背景清晰,目的蛋白表达水平高、培养周期短、抗污染能力强等优点,使得其成为原核表达的首选。
原核蛋白表达的流程为:原核表达载体构建、转化到高效的表达宿主中、目的蛋白诱导表达、细菌扩大培养、制备蛋白提取物、目的蛋白纯化。
看这个过程,相信大家应该都不会觉得困难。确实,首先通过基因工程技术,将目的蛋白基因置入到载体基因中,这个过程可以说非常的重要、而后通过一定的诱导手段,比如加入IPTG诱导剂,来诱导目的DNA的表达。当蛋白表达出来之后,我们再通过相应的方式,对所得蛋白进行相关的检测,比如考马斯亮蓝染色或免疫印迹等方法。相关检测确定蛋白合格后,再通过蛋白纯化的手段提纯蛋白。
当然了,在这个过程中涉及到很多细节操作方面的问题,而且涉及到很多操作方面的小技巧,这些方面都需要引起关注,可以说,这些细节方面的问题是实验数据理想与否的关键因素。普健生物做为一家拥有15年蛋白制备经验的企业,专业为广大用户提供原核蛋白表达服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。