纳米抗体作为一种广泛使用的小分子抗体,因为其体积小、特异性强、稳定性好等一系列特点,使得其在诊断和临床中都有着广泛的使用。有些时候,我们会根据客户的需求来设计相应的纳米抗体产品,以满足可以在抗体某些特性方面的需求,这类抗体我们通常称之为纳米抗体定制服务。那么,如何获得高质量定制型纳米抗体呢?
我知道,纳米抗体的表面大概有10个氨基酸与人的不同,VHH中有4个突变氨基酸增加了VHH的水溶性,所以,我们可以通过对VH序列进行优化,以达到纳米抗体人源化的目的。同时,针对特异性靶点设计,对纳米抗体进行相应的设计,以达到纳米抗体实现相关功能的目的。其中包括抗原检测、羊驼免疫、采血、效价检测、纳米抗体噬菌体库构建以及淘选等一系列方法,实现表达、检测的一站式服务。其过程如下:
1、靶点免疫羊驼。通过四轮免疫之后,进行采血并从其中提取PBMC,通过所提取的mRNA反转录获得cDNA,并扩增获得VHH可变片段;
2、羊驼纳米抗体库构建。通过获得的VHH可变区植入到噬菌体中,通过噬菌体展示,获得库容为8.76*10^9的纳米抗体库;
3.、纳米抗体库淘选及筛选。通过靶点蛋白对构建的羊驼纳米抗体库进行三轮挑选后,排除重复序列,筛选出7条不同的抗体序列,并将这些抗体徐磊注入到可溶性VHH抗体蛋白中,进行再次验证;
总的来说,通过如上一系列的操作,不仅能获得纯度更高的纳米抗体库,也能获得特异性更好的纳米抗体。普健生物专业为广大用户提供纳米抗体定制服务,如果您有相关需求,欢迎前来咨询。普健生物还提供现下各种主流抗体制备产品,比如单B细胞抗体制备,欢迎咨询。