盘点蛋白表达过程中的一些影响因素及规避方法

　　在蛋白表达过程中，常常会遇到这样或那样的问题，这些问题会在极大程度上影响到蛋白表达的结果。无论是五大表达系统中的哪种，总会在操作过程中出现问题。那么，蛋白表达过程中会遇到哪些问题?如何规避这些问题呢?今天，普健生物就和大家具体聊聊。

　　1、载体构建错误

　　其实这是一个新人常常会犯的错误，在克隆时弄错读码框，导致蛋白无法表达。所以，在构建载体的时候，需要考虑好启动子、多克隆抗体位点终止子等等各方面的因素;

　　2、宿主菌选择不当

　　对于不同的宿主菌来说，其表达表达载体是各不相同的，对于一些特殊的载体来说，甚至无法表达。一般在蛋白表达时，需要选择合适的载体;

　　3、密码子优化

　　对密码子进行优化，比如研究密码子的偏爱性以及密码子的使用频率，对密码子进行优化;

　　3、mRNA的稳定性

　　mRNA的稳定性直接影响到转录水平和翻译水平，甚至对于那些拥有稀有密码子的mRNA来说，可能造成其表达问题;

　　4、基因突变

　　碱基的缺失、插入或突变都有可能造成蛋白的翻译问题，所以，在进行表达前，一定要通过测序来避免这种情况的发生;

　　操作过程中，有哪些问题可以规避掉?

　　1、可溶蛋白如何获取?

　　可以选择表达量不高的蛋白表达系统，或者是选这有助于可溶性表达的融合蛋白表达系统;

　　2、什么温度使得蛋白溶解度更大?

　　据统计，在37度环境下制备的蛋白容易生成包涵体，而30度环境下容易产生可溶性和活性都高的蛋白。当然了，对于一些特殊的蛋白来说，15-20度的环境下蛋白产量最大;

　　3、包涵体、内毒素如何规避?

　　选择合适的蛋白表达系统即可，一般来说，在环境配置合适的情况下，就能更好地规避包涵体和内毒素的形成;

　　总的来说，在蛋白表达的过程中，我们需要面对的问题有很多，一些细节方面的问题也更需要引起注意。所以，我们选择好合适的表达系统，配置好相应的环境，并做好包涵体和内毒素的规避，这样就能获得更加合适的蛋白产品。普健生物专业为广大用户提供蛋白表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。