盘点三种稳定细胞系构建方式及其问题解析

　　稳定细胞系也叫稳定细胞表达系，是一种通过将目标基因整合到宿主细胞中后传代，保证细胞可以稳定表达的一种细胞表达系统。就目前来说，稳定细胞系构建的方法主要有三种：慢病毒感染细胞、转座子介导的稳定细胞系构建以及基因敲入法。今天，普健生物就和大家具体聊聊这三种稳定细胞系的构建方法以及相应问题解析。

　　1、慢病毒感染

　　我们知道，慢病毒技术可以感染绝大多数的细胞，而且病毒包装技术也是非常的成熟，可以说是稳定细胞系的首选系统。当然了，慢病毒技术也有着一定的不足之处，比如慢病毒包装容量有限制，对于那些转录区域较长的基因来说，其有着极大的局限性。而且慢病毒为逆转录病毒，对于部分的基因翻译有着一定的影响;

　　2、转座子介导的稳定细胞株构建

　　也叫跳跃基因，通过剪切和粘贴来实现DNA片段的高效转移。转座子其实就是通过编码转座酶，将转座酶基因在基因序列上进行整合;

　　3、基因敲入

　　采用基因技术对目的基因进行定点敲入，依靠细胞自身的修复机制完成;

　　稳定细胞系构建中的常见问题：

　　1、稳定细胞系构建需要进行密码子优化吗?

　　对于不同的基因序列来说，因为其密码子的简易性以及种类、数量上面的察觉，想要构建的稳定细胞系长期稳定的表达，密码子优化是非常必要的;

　　2、如何选择合适的启动子?

　　对于不同的制备需求，我们需要设定特定的启动子。比如CMV启动子除了在干细胞外，其他大多数细胞类型中都可以得到较高活性表达;悬浮细胞中采用SFFV启动子会获得更高的表达活性等;

　　当然了，对于稳定表达系的构建来说，会遇到的问题非常的多，很多时候，即便我们严格按照制备方式来执行也依然可能会出现问题。因为，对于大部分的人来说，稳定细胞系的构建本就是一个庞大的过程，任何一个小问题都可能造成构建的失败。武汉普健生物专业为广大用户提供稳定细胞系构建服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。