所谓的细胞培养,指的是通过体外培养技术实现细胞分裂等生理状态的过程。即在无菌条件下,从机体中提取细胞,并让其在模拟体内环境下继续生存、生长且繁殖的过程。通过细胞培养,我们可以获得大量、性质相同的细胞从而进行抗体蛋白等产品的制备。那么,细胞培养的具体步骤是怎样的呢?今天,普健生物就在这里和大家具体聊聊。
1、细胞传代
当细胞汇合度达到80-90%时,吸出培养液,再加入PBS润洗细胞,吸出PBS后加入胰酶放入培养箱。具体的消化时间因细胞而异,而后通过吹打细胞使之脱落,并尽量让其保持单科细胞的悬浮液。之后,再通过离心机离心,吸出上清液并丢弃。最后再加入到培养基,补足培养液后再继续培养即可;
2、细胞换液
吸出原培养液,并加入PBS混合后晃动培养瓶,润洗细胞后吸出PBS。而后加入含新鲜血清的培养基,最后继续培养即可;
3、细胞冻存
按照7:2:1的比例加入培养基、血清、DMSO配置好冻存液,而后将其至于室温中备用。将细胞制备成悬液,通过离心机去除上清液加入冻存液后摇匀。将所得混合液均匀分装,密封后选择合适温度冻存;
4、细胞复苏
去除冻存的细胞,至于37度热水中解冻。在解冻过程中,需要对其进行观察,当只有一小块冰存在时,将其从水中取出。将细胞悬浮液吸入离心管中,摇匀后离心5分钟,并去除上清液。而后在其中加入培养液并培养,24小时后换一次培养液即可;
总的来说,细胞保存的过程并没有多么复杂,但是在冻存和解冻的过程中有很多细节问题需要引起注意。而且关于细胞冻存的温度需要特别注意,否则很容易造成细胞的损坏。武汉普健生物专业为广大用户提供细胞培养冻存等服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。