杂交瘤细胞测序的步骤及其优势和应用

　　在杂交瘤细胞制备的过程中，虽然筛选出来的杂交瘤细胞能够通过冷冻保存，但是依然存在细胞失活的风险。所以，为了克服杂交瘤细胞保存的问题，我们常常会选择对杂交瘤细胞进行测序，能够快速且准确地进行后期的抗体制备。今天，普健生物和大家具体聊聊有关杂交瘤细胞测序的具体步骤和应用。

　　杂交瘤细胞测序的具体步骤：

　　1、杂交瘤细胞培养。先取出杂交瘤细胞进行复苏，然后在37度的环境下培养10天，至细胞生长旺盛时再收集细胞;

　　2、mRNA提取。裂解细胞后加入氯仿，离心15分钟后提取上清液。取上清液并加入异丙醇离心10分钟，取沉淀洗净，晾干后加入适量DEPC溶解;

　　3、转率cDNA。选择合适的反应体系进行扩增，合成cDNA第一条链，而后根据已知的cDNA合成第二条链;

　　4、获得可变区基因。对cDNA进行扩增，获得轻链/重链可变区基因;

　　5、抗体测序。对基因进行阳性克隆并测序;

　　6、分析测序结果。通过生物信息学分析，得到抗体序列;

　　杂交瘤细胞测序的优势：

　　杂交瘤测序可以更为准确地进行质谱分析，能够提供更加准确且可靠的结果;

　　杂交瘤细胞测序的应用：

　　1、用于进行相关基因测序的专利性保护;

　　2、用于保存测序信息，防止杂交瘤细胞丢失单抗信息;

　　3、用于表达纯度更高的重组单克隆抗体;

　　4、缩短杂交瘤细胞克隆的耗时过程，加速单克隆抗体生产;

　　5、提升单抗亲和力;

　　6、构建嵌合抗体以及抗体人源化;

　　杂交瘤抗体测序能够带来的好处是毋庸置疑的，不仅能够有效降低抗体制备的批次性差异问题，更是能够在极大程度上提升抗体的亲和力。当然了，测序的过程相对来说要复杂一些，需要一定的技术支持。普健生物专业为广大用户提供杂交瘤抗体测序服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。