昆虫表达系统相信大家都不会陌生,它是四大蛋白表达系统之一(主要包含:原核细胞表达系统、酵母表达系统、昆虫表达系统以及哺乳动物表达系统)。关于昆虫表达系统我们在前面和大家简单介绍过,今天我们再和大家具体聊聊有关昆虫表达系统的优缺点及其详细的制备步骤。
昆虫表达系统的优点:
1、能够轻松时间糖基化、乙酰化、磷酸化等翻译修饰操作;
2、分子特性相对简单,使得其操作起来更加的简单;
3、因为其细胞能够悬浮生长,使得其培养起来更加的简单;
4、对于外源基因能够实现高效表达且其繁殖不受外源基因影响;
昆虫表达系统的步骤:
1、引物设计与合成
选择合适的基因序列,并将目的基因引入到序列中;
2、基因扩增与克隆
通过所得RNA进行反转率,合成我们所需的cDNA,并以cDNA为模板,对其进行扩增和测序;
3、病毒质粒构建
将扩增所得基因克隆到质粒中,并对其进行培育、扩增;
4、表达蛋白
通过设计合理的表达环境,对所得基因序列进行表达,获得蛋白表达产物的混合液;
5、蛋白纯化及鉴定
通过蛋白纯化的手段对蛋白进行提取和纯化,并对纯化后的蛋白进行鉴定,以测定所得蛋白是否符合我们需求;
大家应该不难看出,昆虫表达系统和其他表达系统的表达步骤之间并不存在太大的差别,只是在选择宿主方面存在着不同,其他步骤大概类似。但是,想要表达成功,则有很多细节方面需要引起注意,而恰恰是这些细节制约着所得蛋白是否能够满足需求。普健生物专业为广大用户提供昆虫表达蛋白服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。
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