杆状病毒昆虫表达系统是现如今使用最为广泛的表达系统之一,其不仅能有效提升蛋白表达效率,而且安全性好,具备良好的生物活性。而且因为其通过感染昆虫细胞或幼虫来表达外源蛋白,所以不会对哺乳动物产生任何致病性,因此,自诞生以来,就得到了广泛的应用。那么,杆状病毒昆虫表达系统的具体涉及理念及其构建方法是怎样的呢?下面,普健生物就和大家具体聊聊。
杆状病毒昆虫表达系统的设计理念是怎样的?
其实和哺乳动物表达系统一样,杆状病毒昆虫表达系统也是通过将外源基因通过剪切、对接等方式,将外源基因加入到昆虫细胞中,而后让目的蛋白随着昆虫细胞的表达而表达。之后再通过蛋白析出、纯化等一系列的操作,最终获得我们所需蛋白的方式。
杆状病毒昆虫表达系统的构建方法是怎样的?
和哺乳动物表达系统不同,杆状病毒昆虫表达系统主要分为两种:在昆虫细胞内重组和在昆虫细胞外重组。
在昆虫细胞内重组:
最早期常用这个方法,通过将未加修饰的野生病毒进行重组,后来发展成采用线性化的病毒DNA替代,将其与转染载体进行昆虫细胞共转染时,只要不发生同源重组,那么,重组率则会高达100%;
而后,大家对这个方法进行了改良,比如直接克隆等方法,不仅能避免大肠杆菌内的重组,也能有效加速重组的过程。
在昆虫细胞外重组:
通过将外源基因重组到病毒基因中去 ,而且只用重组杆状病毒DNA去转染昆虫细胞。当然了,随着技术的发展,有科协家利用噬菌体编码重组酶,让其提高重组效率,而后在通过染色等手段进行重组体的鉴定等;
总的来说,杆状病毒昆虫表达系统在一定程度上解决了其他表达系统的不足之处,无论在方法还是在制备成本上都有着一定的优势,但是也有着一定的不同。不过,我们相信,随着技术的不断发展,在后期其一定会得到更好的利用。普健生物专业为广大用户提供蛋白表达服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。