有关重组蛋白表达和纯化功能方面的分析

　　在我们进行相应的蛋白制备工作时，表达成功可以说是至关重要的，但是一些细节方面的工作如果做得好的话，下游实验中应用起来会变得更方便。不仅仅能提升蛋白的水溶性，而且可以在极大程度上节约时间。具体操作，普健生物在下面和大家一一道来。

　　选择正确的标签可以说是一项艰巨的任务，因为合适的标签不仅能帮我们获得可溶性蛋白，而且能够方便我们纯化的方案，且不会对后续的实验造成影响。在这里，我们唯一需要担心的事情就是那个标签有助于目标蛋白的溶解、表达及纯化，因为标签本身是可以切除的，所以，不用担心它会干扰到蛋白。

　　硬性蛋白可溶性的三个关键参数：

　　IPTG浓度

　　在不同浓度下，蛋白的特性是不一样的。但是我们需要注意，不要改变细胞中蛋白的折叠功能。在日常实验中，我们可以考虑多尝试几个不同的浓度，选择一个最高可溶性蛋白的产量;

　　温度

　　偶尔我们在37度的典型温度下，通过生长和诱导分离的方式来分离蛋白。当然了，我们也可以试试在较低温度下进行增强，比如尝试30度、25度、18度等温度下进行诱导;

　　诱导时间

　　诱导时间并不是说越长越好，因为宿主细胞会对蛋白会造成一定的降解，毒蛋白更甚。所以，在诱导期间，我们需要隔几个小时进行取样，并检测蛋白的表达情况。一般来说，37度时4小时最佳，30度5-6小时最佳，25度情况下可以允许过夜;

　　当然了，在正式投入使用之前，我们可以对其进行预实验，通过各种不同的实验进行测试，选择一种最合适的方式来投入到后期的实验中。当各种方法都无法达到预期时，我们可以考虑只表达一部分蛋白，或者选择不同的表达系统来进行表达，最后甚至可以考虑采用调整各种变性条件下的纯化。总之，无论用什么办法，达到自己的要求即可。更多蛋白表达方面的知识，敬请关注普健生物。