重组蛋白表达中常见的一些问题及解决办法

　　重组蛋白表达是现阶段我们生产蛋白产品最常用的方法之一，它在极大程度上解决了天然蛋白抗体解决不了的问题。但是，在日常我们表达蛋白的过程中，即便是按照实验顺序严格执行，依然会遇到很多的问题，最终导致蛋白表达失败的情况。在这里，普健生物具体和大家聊聊蛋白表达的一些常见问题，及其对应的解决办法。

　　1、设计方面的问题

　　如果表达出来的蛋白出现密码子移位、稀有子密码问题、信号肽问题、蛋白大小问题、标签蛋白选择问题以及GC含量太高等问题时，就是因为序列设计方面的问题。这个时候我们就需要回忆反思一下，看看具体的问题出来哪里，然后有针对性地进行解决;

　　2、操作过程方面的问题

　　操作过程方面的问题主要出现在质粒构建和表达工程菌使用等方面的失误所造成。在质粒构建完成后，必须测序确认，保证无突变更不能出现碱基多余或是缺失，并确认外源片段插入后读框码与载体步调完全一致才行。

　　而针对工程菌的使用，必须确认标准有效，与载体质粒配套，否则，容易造成表达质粒丢失的情况;

　　3、蛋白容易降解的问题

　　很多蛋白在完成表达等一系列的过程后，我们却无法分离或提纯出来，主要是因为刚表达出来就被细菌内的蛋白酶降解掉了，这个时候我们就需要看看过程，寻找一下相应的解决办法;

　　4、培养基的问题

　　一些蛋白在LB培养基中表达不成功，但是换成TB或2*YT培养基后就能表达成功。所以，当无法表达成功时，我们可以考虑更换培养基来继续表达;

　　5、分子量异常的问题

　　有一些蛋白的分子量和我们的预想有着一定的偏差，这个时候我们可以分析一下蛋白，看其本身氨基酸组合是否符合均态分布的规律。实验过程中，我们需要仔细对比诱导/非诱导菌体蛋白带谱差异，再结合数据进行判断;

　　当然了，蛋白表达中可能会遇到各种各样的问题，并不是我们如上所说的几种，我们也可以结合实验数据，对比相关文献进行处理。当然了，实在解决不了的时候，可以考虑通过专业的蛋白表达公司来处理。普健生物专业为您提供蛋白抗体表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。