对于重组蛋白表达来说,我们常常会在实验过程中遇到这样或那样的问题,最终导致蛋白表达的效果达不到我们的预期。虽然我们通过哺乳动物表达系统克服了原核翻译后修饰表达的问题,而且通过瞬时表达和稳定转染等一系列的方法有效地提升了表达率,但是也因为成本高、操作难度大,不适合小型公司的使用。
那么,有没有什么办法可以提升小规模重组蛋白表达效率呢?答案是肯定的。
方法一:序列优化
根据使用需求,设计最佳的编码序列用于表达蛋白。总的来说,就是在开始蛋白表达之前,我们就通过密码子优化算法以及一些表达载体选择,为表达提供优质的环境,这样能在极大程度上提升蛋白表达的效率;
方法二:提升蛋白溶解度
因为溶解度低的问题,也会导致蛋白表达的效率降低。因此,我们可以通过温度调控、培养基选择、加入一些添加剂等方法来提升蛋白溶解度,以便于提升蛋白的表达效率;
方法三:辅助融合剂使用
比如蛋白标签的使用。我们知道,当我们将标签蛋白插入到重组蛋白表达序列上时,蛋白的表达效率就能够得到有效的提升,而后再通过酶切或添加化学试剂的方式切除的方式去除。当然了,在选择之前,我们需要针对特定的表达系统选择合适的标签,这个需要结合多种因素进行考虑;
方法四:纯化方法优化
针对下游的使用需求和纯度需求来设计不同的纯化方法。一般来说,对于蛋白表达量高的可以考虑一步式亲和纯化,如果需要进一步纯化,可使用亲和纯化后分子排阻色谱进行。当然了,在不同情况下,也可以考虑使用离子交互色谱;
通过如上的方法,再结合自己的需求来设计,这样就能在一定程度上提升蛋白的表现率。当然了,针对不同的情况,还可以适当的增加一些其他方法,毕竟不同的使用环境下,方法也是各不相同的。普健生物专业为广大用户提供重组蛋白表达服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。