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什么是杂交瘤测序?它的操作流程是怎样的?

发表时间:2023-03-06 访问次数:2408

  说到杂交瘤测序,大家或许并不怎么熟悉,但是说到抗体测序的话,相信大家一定会非常的了解。在我们制备单克隆抗体时,常常会使用到杂交瘤技术,制备出的杂交瘤需要尽快冻存,但是,冻存过程中往往会出现失活的现象。所以,我们就需要对筛选出的杂交瘤细胞进行相关测序工作。

  经过测序后的杂交瘤,能够知道其完整的序列,后期在制备单克隆抗体的时候,可以通过相关序列通过重组抗体来制备所需抗体。不仅能解决杂交瘤失活的现象,也能保证抗体不同批次之间的一致性。当然了,杂交瘤测序的意义不止于此。

  杂交瘤测序的流程是怎样的呢?

  1、杂交瘤细胞RNA提取。从杂交瘤细胞中提取完整的RNA序列;

  2、RNA反转录。通过反转录,获得完整的DNA序列;

  3、获得抗体轻重链基因。通过一系列剪切提取的操作,获得抗体重链/轻链的可变区基因;

  4、轻重链基因测序。通过抗体测序的手段,测定轻重链的基因序列;

  5、基因生物学分析。分析所得基因的生物学特性,剔除其中非功能性DNA,最终获得我们所需抗体序列;

  6、得到抗体序列;

  相对于那些直接对抗体进行蛋白分析从而得到基因序列的方式相比,杂交瘤测序所得的基因序列更加的准确,而且能够有效避免了因为亮氨酸和异亮氨酸难以区分的问题。所以,总的来说,杂交瘤测序的准确性更高,使用起来也更加的方便,也为抗体人源化的实现奠定了更好的基础。普健生物专业为广大该用户提供杂交瘤测序服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。