盘点大肠杆菌原核蛋白表达的一些常见问题

　　大肠杆菌是最早用来表达重组蛋白的第一个宿主，因为其成本低、效率高、遗传背景清晰等特点，使得其在实验室中使用非常的广泛。但是，对于很多人来说，想要完美实现大肠杆菌原核蛋白表达相对来说也是非常困难的。有鉴于此，普健生物在这里和大家具体聊聊有关原核细胞表达的常见问题。

　　问题一：什么情况下选择大肠杆菌表达系统

　　大肠杆菌表达系统是最常见的表达系统之一，优点是遗传背景清晰、成本低、表带量高等，缺点是容易形成包涵体以及无法进行表达后修饰。所以，这个表达系统更适合用来进行原核表达不需要后期修饰的蛋白，特别是小分子蛋白;

　　问题二：如何形成二硫键

　　未改造的大肠杆菌形成二硫键的能力相对要差一些，需要有针对性地对二硫键形成进行改造，提升其表达能力;

　　问题三：大肠杆菌的表达载体有哪些

　　用于大肠杆菌表达的载体较多，常用的有pET系列、pGEX系列、pCold系列等;

　　问题四：如何实现大肠杆菌的分泌表达

　　大肠杆菌拥有一套特殊的分泌机制，通过外分泌信号将蛋白富集到培养基中，但是由于其细胞壁较厚，使得分泌所得的蛋白量较低;

　　问题五：为什么会形成包涵体

　　原核表达常常会因为蛋白的错误折叠或过快表达而形成包涵体，主要原因是因为：目标产物本身性质不合、宿主体系不合以及表达条件不合等原因;

　　问题六：原核表达如何实现蛋白纯化

　　原核表达蛋白纯化的方式主要有亲和层析、离子交换、凝胶排阻层析等;

　　问题七：去除信号肽会不会影响蛋白表达

　　原核表达真核蛋白时信号肽是一定要去除的，这个方法在大肠杆菌中可行;

　　问题八：如何提升蛋白的可溶性

　　原核大量表达时，很容易形成包涵体，可以通过选择促溶标签、筛选合适宿主菌、改变培养诱导条件等方法提升其可溶性;

　　总的来说，大肠杆菌原核蛋白表达过程中需要注意的事项还是比较多的，但是相比其他技术来说，其技术条件相对成熟，操作也更加方便。当然了，对于一些特殊表达，大肠杆菌可能不合适，这个时候就需要挑选一个更加合适的表达方法了。普健生物专业为广大用户提供大肠杆菌原核表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。