盘点原核蛋白表达中常见的五大问题

　　原核蛋白表达是现阶段较为常用的蛋白表达方式之一，因为其遗传背景清晰、细胞增殖快、蛋白表达量高、稳定性好等特点，使得其在蛋白表达中极为常用。但是，很多人在采用原核蛋白棒表达的时候，常常会出现蛋白无法表达的情况。有鉴于此，普健生物在这里和大家聊聊有关原核蛋白表达中常见的几大问题。

　　1、不知道蛋白的特性及其结构

　　当我们不知道蛋白结构和特性的时候，我们可以先确定一下这个蛋白是否有人研究过，是不是新发现的蛋白。如果有人研究过，则可以直接查询相关文献，而后采用软件来测序。如果没人研究过，则可以考虑先测试部分氨基酸，而后再设计引物克隆;

　　2、如何选择宿主菌

　　原核表达系统和真核表达系统的密码子偏爱性不同，所以，不能直接用真核表达的密码子。如果蛋白不表达，则可能是因为蛋白为毒蛋白，或序列中有稀有密码子;

　　3、测序正确但是蛋白无法表达

　　解析一下稀有密码子，如果较多，则需要采取其他办法。也可能是基因本身的问题，或者表达量过低的情况;

　　4、细胞为什么会停止生长

　　通常情况下，如果细胞停止生长，那么可能就会造成克隆能力大大降低，但是却不会死亡。我们可以用菌落的形成来检测表达系统的性能;

　　5、表达量和可溶性低的原因

　　一般来说，原核表达和可溶性的不同和很多方面有着关系，比如蛋白合成速率、密码子优化、表达温度以及诱导条件优化等，只有做好这些方面的工作，才能更好的促进蛋白的表达和可溶性;

　　当然了，在原核蛋白表达过程中可能会遇到各种各样的问题，相对来说，都是因为日常操作中的一些细节操作方面的问题，一般只要注意到了，问题都不会很大。而且在原核表达中控制好相应的外部环境问题，能够在更大程度上保证蛋白的表达。普健生物专业为广大用户提供蛋白表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。