盘点质粒提取过程中的一些常见问题

　　质粒广泛存在于生物界，是易总存在于染色体意外的DNA分子，具备自主复制能力。在日常蛋白制备过程中，我们常常通过基因技术对质粒基因信息进行修改，从而制备我们所需的蛋白。但是在制备过程中，会遇到很多问题，导致蛋白制备失败。有鉴于此，普健生物和您具体聊聊有关质粒提取过程中的一些常见问题。

　　1、时间控制方面的问题

　　对于裂解来说，时间不宜过长，一般来说，不要超过5分钟。吸附时间不够，或者溶解时间不够，都会造成质粒DNA提取失败;

　　2、大肠杆菌老化

　　大肠杆菌频繁使用会导致其老化的现象，所以，在进行大肠杆菌培养时，需要重新挑选菌落进行培养;

　　3、质粒复制数量过低

　　所选质粒拷贝数过低，会在很大程度上早场质粒DNA提取量低的情况，在实验时，需要尽可能挑选高拷贝数的载体;

　　4、配置的溶液使用不当

　　溶液温度过低时，可能会出现浑浊的情况，之后保持在37度的环境下，才能保证溶液清亮;

　　5、吸附柱过载

　　对于不同的产品来说，吸附柱的吸附能力是各不相同的，如果提取的质粒数量较大，需要进行多次提取;

　　6、质粒未能全部溶解

　　洗脱质粒的时候，需要适当对其进行加温或延长溶解时间;

　　7、洗脱液加入的位置不对

　　洗脱液需要在硅胶膜的中间位置加入，这样才能保证其达到最大洗脱率;

　　8、过多的乙醇残留

　　在我们选择漂洗液进行洗涤后，需要尽可能地去除残留的液体，以避免残留的乙醇对后期的实验造成影响;

　　9、洗脱液的体积过小

　　洗脱体积对回收率会造成一定的影响，过高的洗脱体积会造成产品浓度过低的情况;

　　虽然说质粒提取能够在很大程度上降低目的蛋白制备的操作步骤，但是，操作过程中也有很多需要注意的细节问题，需要在制备过程中多注意。当然了，对于大部分的公司来说，这个过程基本上都不成问题。普健生物为您提供专业的蛋白制备服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。