盘点蛋白纯化的一些常用方法及步骤

　　蛋白纯化是实验中最重要的方式之一，它不仅能提升蛋白纯度，保障实验的顺利进行，而且能够提升实验的精度。所谓的蛋白纯化其实就是依据生物学的特性(比如电荷、大小、亲疏水等)，选择出合适的方法，将蛋白从混合物中分离出来。下面，普健生物和大家具体聊聊有关蛋白纯化的常用方法和步骤。

　　一、凝胶过滤层析法

　　原理：主要通过分子的大小进行分离，利用不同孔径的凝胶来过滤，从而将较大和较小蛋白分离开来;

　　具体步骤如下：

　　1、将混合物加入到凝胶柱中;

　　2、加入缓冲液对其进行洗脱，将较大分子留下来;

　　3、将大小适中的蛋白保留下来;

　　4、而后通过添加洗脱缓冲液从凝胶柱中洗脱出来;

　　二、亲和层析法

　　原理：通过抗体亲和力之间的不同来实现蛋白纯化;

　　具体步骤如下：

　　1、将蛋白加入到含特异性结合配体的亲和层析柱中;

　　2、让抗体与配体之间进行结合;

　　3、通过加入洗脱液将非特异性结合的组分洗脱出来，实现蛋白纯化;

　　三、离子交换层析法

　　原理：通过抗体分子与离子交换柱之间的相互作用来实现纯化;

　　具体步骤如下：

　　1、将混合物放入离子交换柱中;

　　2、加入缓冲液进行洗脱;

　　3、通过抗体表面电荷不同，能够保留在离子交换柱中;

　　4、而后通过洗脱液将其从交换柱中洗脱出来;

　　四、逆向相色谱法

　　原理：利用目标抗体与逆向相色谱柱中亲疏水基团之间的相互作用来实现纯化;

　　具体步骤如下：

　　1、将混合物加入到平衡好的逆向相色谱柱中;

　　2、加入缓冲液进行洗脱，让疏水性较低的分子无法通过逆向相色谱柱中;

　　3、因为亲疏水性不同，使得其保留在逆向相色谱柱中;

　　4、通过PH值、酸碱度等不同，将目标抗体从色谱柱中洗脱出来;

　　其实大家不难看出，抗体纯化在步骤上其实并不存在太大的区别，只是在吸附柱以及洗脱液上面有着一定的区别，需要根据具体条件来具体调整。当然了，也需要有一定的技术支持。普健生物专业为广大用户提供蛋白纯化服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。