关于重组蛋白表达及其纯化你知道多少?

　　关于重组蛋白，相信一些有一点技术的公司都可以做表达出来，但是，如果想要将蛋白用于下游实验，那么，成功表达的重组蛋白就显得非常的重要了。蛋白并不是说表达出来就行，而是需要为后续的实验提供有效助力，如果在一开始的时候就优化了蛋白的可溶性，那么，后续的实验将会得到极大的简化。因此，为重组蛋白选择一款正确的标签就显得非常重要了。

　　常用的标签中都有什么?

　　很多人对于“正确”这个词有着一定的误解，只是觉得挑选一个标签让蛋白得以表达即可。其实不然，所选的标签需要帮助我们获得可溶性蛋白，不仅简化相应的蛋白纯化方案，更是不会对后续实验产生影响，甚至起到促进作用。所以，对于那些具备多个切割位点的蛋白来说，我们需要考虑的问题就是蛋白的溶解、表达以及纯化点是否可以切除，以及切除这个点是否会影响到后续目的蛋白的行为。

　　如何获得可溶性蛋白?

　　对于重组蛋白来说，它在真核细菌中表达时，最常见的问题就是不溶。所以，想要使得其可溶性提升，需要结合如下三个方面来进行考虑。

　　1、IPTG浓度

　　简单来说，就是控制好IPTG的浓度，可以尝试多几个不同的浓度，选择一下，看哪个浓度能够提供最高的可溶性蛋白浓度;

　　2、温度

　　首先，我们选择37度的典型温度来进行生长和诱导分离，一般来说，在更低的温度下蛋白的表达程度更高。然后，我们可以分别尝试在30度、25度、18度等条件下进行诱导，选择最佳诱导温度后，再加入IPTG;

　　3、诱导时间

　　当然了，诱导的时间并非越长越好，对于那些“有毒蛋白”显得尤为明显。一般来说，我们在诱导时，选择隔几个小时取一次样，并检查目的蛋白的表达量;

　　当然了，如果通过如上这些手段都没有达到我们的要求，那么，我们可以考虑通过只表达蛋白的一部分，或者选择不同的表达系统来进行表达，甚至保留目的蛋白的翻译后修饰。总的来说，通过多次的实验总会获得我们所需的重组蛋白。武汉普健生物专业为广大用户提供重组蛋白表达服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。