目前的生物行业发展可谓是红红火火,几乎成为全球瞩目的热点,甚至乔布斯都预言:下一个经济发展的爆点必然是生命大健康行业。而随着人们生活水平的不断提高,人们对健康的渴望也变得越发迫切起来。但是,我们每天都在说蛋白纯化,但是,奇怪的是我们好像日常用不上它,它到底是用来干嘛的呢?今天普健生物就和大家具体聊聊。
其实蛋白纯化技术在生物化学领域有着重要的作用,也是使用最为广泛且重要的技术之一。打个比方,一个真核细胞可以产生数以千计的蛋白,这些蛋白的作用可谓千奇百怪,而且含量也是各不相同,有的蛋白含量很高,有的甚至只有几个,而且这些蛋白之间会相互影响,所以,如果我们想要研究某个蛋白的特性,就需要将其中的蛋白和非蛋白分离出来,这个过程也就是我们常说的蛋白纯化。
蛋白纯化的方法介绍:
一、根据溶解质不同的分离方法
1、盐析法。简单来说,不同蛋白会随着盐浓度的不同而溶解度变化的情况,也就是我们常说的岩溶。当盐浓度持续升高时,蛋白的溶解度会出现不同程度的下降并析出,这个现象就称之为盐析;
2、等电点沉淀法。不同蛋白在经典状态下的斥力最小,溶解度也最小,也就是说,而不同蛋白的等电点是不同的。所以,我们可以通过调节溶剂的PH值,使得其达到某一蛋白的等电点,而造成沉淀的现象。只是,如果单独的使用这个方法效率较高,我们通常会结合盐析法来使用以提交其效率;
3、低温有机溶剂沉淀法。在溶液中添加甲醇、乙醇或丙酮等有机溶剂,当达到一定的浓度后,可以造成一些蛋白溶解析出(PS:这个方法虽然在效果上要优于盐析法,但是容易造成蛋白变质,需在低温环境下使用);
二、根据分子大小的分离方法
1、透析、超滤。其实就是采用半透膜将大小不同的蛋白质分开的方法。当然了,如果觉得透析的速度太慢,可以考虑采用超滤的方式,也就是采用高压或离心机的原理,使得水和小分子强行通过半透膜,留下我们需要的蛋白产品的方式;
2、凝胶过滤法。有可以称之为分子筛层析法。它是根据分子大小进行分离的方式,采用填料葡萄糖凝胶和琼脂糖凝胶的方式;
三、根据蛋白带电性质不同进行分离
1、电泳法。不同蛋白在同一PH环境下的电量不同,使得其在迁移时分部会变得不同。所以,我们可以采用这个方式对其进行分离;
2、例子交换层析法。用例子交换层析柱对蛋白溶液进行分离时,会将带有与离子交换剂相反的蛋白吸附出来,然后再采用改变PH值或是离子强度的方法将蛋白洗脱下来;
四、根据蛋白特异性的分离方法
也就是亲和色谱法,其实就是一套多种方法的联合使用方式。通过对组织捣碎、超声波处理、反复冻融,最后通过化学处理方法的方式,后面我们会和大家具体聊聊有关这个方法的详细过程,在这里我们就不一一赘述了;
总的来说,无论采用那种方法,都需要结合蛋白的特性来挑选合适的方法,这样不仅能提纯出我们需要的蛋白产品,更是能够在极大程度上节约我们的处理时间和物料投入。普健生物专业为广大用户提供蛋白纯化服务,如果您有相关需求,欢迎来电咨询。