采用真核表达系统表达蛋白时如何做好蛋白纯化?

　　真核蛋白表达系统是我们比较常用的一种蛋白表达方式，它一般采用酵母、昆虫、哺乳动物来进行表达，所产生的蛋白和靶DNA具备高度的相似性，能够诱导高效表达。但是其在实验过程中的可诱导性、生物利用率、剂量依赖性等方面有着较高的要求，所以，日常使用中需要权衡利弊后再来选择。那么，在真核蛋白表达时，我们如何进行蛋白纯化呢?

　　其实我们知道，无论是原核表达还是真核表达都需要进行蛋白纯化，这样才能提升蛋白的作用效果，使其达到我们的使用需求。所以，蛋白纯化，是蛋白表达过程中非常重要的一个环节。

　　天然大分子蛋白纯化：

　　通过蛋白特性，选择合适孔径的分子筛进行纯化，同时搭配阴离子柱或阳离子柱，可以获得纯度高达95%的蛋白;

　　天然小分子分离纯化：

　　通过分子筛过滤掉大部分的大分子，然后再使用大孔树脂或反向树脂纯化小分子化合物，再通过HPLC和MS对小分子肽进行筛选即可;

　　未知蛋白纯化：

　　结合客户提供的蛋白特性，选择相对应的方法，最后采用质谱鉴定，看是否满足用户的需求。一般来说，对于这种未知的蛋白质，我们所采用的方法也不外乎如上两种，或者结合使用的方式;

　　真核蛋白纯化前客户需要提供哪些支持?

　　1、基因序列。为了更好地制备蛋白，客户需要提供准确的基因序列，并告知蛋白标签及相关要求，同时告知蛋白的用途(一般来说，制备的蛋白仅供研发使用，不适用于临床使用);

　　2、提供质粒。客户需提供质粒，且量不小于100ng，同时提供序列文件;

　　3、根据实验要求，蛋白序列、分子量、等电点等信息;

　　真核蛋白表达系统虽然说获得的蛋白特性更强、效果更好，但是相关投入以及技术需求就不是原核蛋白表达系统所能比拟的。当然了，在蛋白制备完成后，所用的蛋白纯化方法较为类似，可以采用类似的方法。普健生物专业为您提供真核蛋白表达及蛋白纯化服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。