如何快速确定所表达重组蛋白的稳定性

　　在我们的细胞中，蛋白的生成和降解处于一种平衡的状态，这也保证了细胞处于一种平衡状态。如果想要细胞更高效的生成蛋白，我们就必须了解蛋白的半衰期。

　　其实我一直很好奇，细胞为什么要降解掉它辛辛苦苦生成出来的蛋白呢?其实，它的主要目的是清除其中已经完成工作的蛋白，避免因为某种蛋白的作用而造成不良的影响。那么，蛋白的稳定性就成为制约我们生产蛋白的主要因素。如何检测所表达重组蛋白的稳定性呢?今天普健生物就和大家具体介绍几种方法。

　　1、脉冲追踪

　　这是一种传统追踪蛋白并估算其稳定性的方法，需要处理放射性。通常我们会在短时间内放射性标记细胞，然后再蛋白动力学过程中添加未标记的前体。随着旧蛋白的降解新蛋白被合成的同时，我们检测样品中的放射性，以此来确定蛋白的半衰期;

　　2、环己酰亚胺追踪

　　这个方法相对脉冲追踪要简单一些，不用脉冲追踪和放射性使用，而是改为添加一种环己酰亚胺来一直蛋白的合成，而后再来评估目的蛋白随时间的降解情况;

　　3、抑制剂使用

　　我们知道，细胞内蛋白降解主要有两种途径：蛋白酶体途径和溶酶体途径。通过一系列酶，将蛋白用泛素标记，让其最终定向称为细胞蛋白酶复合体，然后我们通过观察其降解情况来测定蛋白的半衰期。而溶酶体途径则是通过药物抑制蛋白酶复合体，然后再评估这种干预对蛋白表达的影响;

　　4、相关翻译后修饰蛋白降解法

　　这个方法需要对了解目的蛋白的降解途径，然后分析其标签，看哪些标签是必须的。而后，通过对标签的观察来查看蛋白的半衰期;

　　5、蛋白的泛素化动力学

　　前面我们和大家聊过有关泛素化方面的知识，有需要可以通过“个性化修饰性抗体技术解读之泛素化抗体”。检测泛素化可以提供一个强有力的数据，目的蛋白很有可能称为蛋白酶体的靶点。然后用抗泛素蛋白抗体来评估其泛素化状态;

　　总的来说，确定蛋白的半衰期的方法有很多，我们完全可以结合自身的需求以及实际情况来选最合适的方法。普健生物作为一家拥有15年蛋白抗体生产经验的企业，专业为广大用户提供单边抗体制备服务，如果您有蛋白表达、抗体定制、抗体测序、抗体人源化等需求，欢迎来电咨询。