当我们一些实验需求时,我们常常会用到稳定细胞株构建技术,比如:需要频繁转染、提升基因干扰效果、需要进行极高拷贝数的表达等等。而稳定细胞株技术就是在活细胞的状态下,通过大量多代的培养所得的细胞。这类细胞不仅具有正常的生理功能,而且可以实现无限繁殖,能够稳定地表达蛋白。
稳定细胞株的构建主要包括如下过程:
1、构建载体。
2、转染、感染。
3、目的蛋白检测。
4、抗生素筛选。
5、目的蛋白再次检测。
6、细胞株稳定性检测。
稳定细胞株的构建一般采用两种方法:体质转染后的单克隆稳定株;二是应用逆转录病毒,慢病毒转染,从而筛选稳定细胞株。
通常情况下,我们会将质粒整合到染色体上,然后用相应的质粒中的DNA去筛选细胞核,形成稳定表达的细胞株。
细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cell line), 由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代,或传代次数有限, 可称为有限细胞系(finite cell line), 如可以连续培养, 则称为连续细胞系(continuous cell line), 培养50代以上并无限培养下去。
采用稳定细胞株构建技术能够在极大程度上保持细胞的稳定性,从而稳定地提供蛋白产品,让其不会因为不同细胞而产生蛋白差异的现象。而且大量表达的稳定细胞株可以在更大程度上解决大批量基因片段引入的问题,实现更好地表达。普健生物是一家拥有15年蛋白抗体生产经验的企业,专业为广大用户提供蛋白抗体制备服务,优质的稳定细胞株构建技术,为您解决各类蛋白抗体需求。