稳定细胞株构建过程中的一些常见问题盘点

　　为了能够实现蛋白的大规模生产，我们通常会选择通过构建稳定细胞株的方式来实现。当然了，稳定细胞株构建的过程相对来说复杂，而且中间会因为很多原因造成构建失败。有鉴于此，普健生物专业为大家盘点一下有关稳定细胞株构建过程中的常见问题。

　　1、是否需要进行密码子优化

　　因为密码子种类多样、数量差异等问题，所以，密码子优化对稳定细胞株的构建有着很大的作用，能够大幅度提高目标蛋白的表达量;

　　2、如何选择合适的启动子

　　对于大部分的启动子来说，使用得当都能在大多数细胞中获得高表达性。CMV、EF1A、CAG、CBh、SFFV等都属于强启动子，可以作为稳定细胞株的启动子;

　　3、稳定细胞系培养体系

　　构建稳定细胞系时一般建议使用版抗性筛选浓度来维持细胞生长，可添加葡萄糖来调节细胞代谢水平，维持细胞增殖;

　　4、标签是放N端还是C端

　　这个需要结合实际情况来选择，如果信号肽在N端，则将标签放在C端;蛋白较小也放C端，纯化中需要酶切标签则推荐放N端;

　　5、是否需要构建稳转敲除的细胞系

　　一般来说，我们不建议敲除元件稳定持续的表达在细胞中，因为这个操作会在很大程度上影响细胞的状态;

　　稳定细胞株构建一般使用在蛋白大规模生产时，在构建过程中需要注意的问题也不止如上几样，各个方面的细节操作也需要引起注意，而且需要有相应的技术支持。普健生物专业为广大用户提供稳定细胞株构建服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。