稳定细胞株构建的流程及其难点分析

　　就目前来说，稳定细胞株和过表达细胞株是基因研究中最常用的方法，同时通过RNA感染技术，即可实现我们常说的稳定细胞株构建。这个方法相对来说相对困难，需要有一定技术实力的公司才能实现。有鉴于此，普健生物就在这里和大家具体聊聊有关稳定细胞株构建的流程及其重点难点分析。

　　稳定细胞株的构建流程：

　　1、构建载体。通过过表达或干扰载体的操作获得合适的载体细胞;

　　2、病毒包装。通过慢病毒包装以及相关操作，获得适合用于感染的病毒;

　　3、细胞转染。将病毒转染到目的细胞中，并筛选出转染成功的细胞进行细胞株培养;

　　4、药物筛选。通过提纯和筛选，获得高纯度的目的蛋白溶液;

　　5、蛋白功能分析。采用各种试剂进行蛋白的相关功能分析，看其是否能够能够满足我们的需求;

　　这个时候大家可能就觉得非常的奇怪了，明明这么简单的几个步骤，怎么就困难了呢?下面，我们和大家具体分析一下稳定细胞株构建的难点所在。

　　1、所用细胞不合适。一般来说，很多悬浮细胞对病毒的转染效果并不好，而且操作过程非常的困难。还有就是对于那些极度敏感的细胞来说，病毒的入侵可能直接造成细胞的死亡;

　　2、病毒超过了过表达细胞稳定性的极限。基因会通过病毒随机插入到目的细胞的基因组中，而插入的基因可能会对已经过表达细胞的稳定性造成影响，直接造成其无法表达的情况。或者在后续细胞传代中，会出现基因表达逐渐下降的情况;

　　3、安全性不佳以及成本高。一般来说病毒操作的成本都很高，即便几千块的病毒包装都需要2-3周的时间去实现。而且病毒对人体都存在着一定的感染性，需要的实验室安全等级也较高;

　　4、病毒优化和存储性问题。不同批次的病毒都会存在着一定的差异，所以，每次实验都需要对病毒进行相关的检测，以保证使用最优病毒进行实验。同时，病毒都需要在-80度的环境下保存，时间超过2周都会出现活性下降的情况;

　　总的来说，进行稳定细胞株构建需要有更高的实验成本和安全成本，只有在满足了这两项需求的前提下，我们才可以进行后续的操作。而在进行实验的时候，我们需要针对其重点难点做好相应的备份和准备工作，这样就需要有更高的技术去做支撑。只有做好了这些方面的工作，才能保证稳定细胞株得以构建。普健生物专业为广大用户提供稳定细胞株构建服务，如果您有相关需求，欢迎来电咨询。